连接蛋白43磷酸化状态与缝隙连接通道功能的关系

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1、连接蛋白43磷酸化状态与缝隙连接通道功能的关系【摘要】缝隙连接(GJ是介导相邻细胞间直接通讯的特殊膜结构。连接蛋白43(Cx43的磷酸化与去磷酸化对GJ通道的功能有非常重要的影响。激活不同的蛋白激酶可引起Cx43的羧基端21个丝氨酸中的12个残基、6个酪氨基的2个残基(247、265磷酸化；通过点突变方法研究发现,这些特殊部位的磷酸化导致GJ通道功能改变。现就Cx43磷酸化状态与GJ通道功能的关系作一综述。【关键词】缝隙连接；连接蛋白43；磷酸化；去磷酸化　　研究表明，连接蛋白43(Cx43和细胞间隙连接通讯(GJIC在多种心血管疾病的发生、发展起重要作用。高血糖可以促

2、进Cx43磷酸化，引起缝隙连接(GJ功能的改变。因此，研究Cx43的磷酸化状态改变与心脏GJ功能的关系，对阐明磷酸化对GJ的作用机制，阐明DM患者心律失常的发生机制有重要意义。1GJ的结构GJ又称间隙连接、通讯连接,是由连接相邻2个细胞之间的连接通道排列而成的一种特殊膜结构。每个GJ通道由相邻2个细胞各提供1个相同或不同的连接子(亦称为半通道以非共价键对接而成的亲水通道，直径约1.5nm,允许分子质量低于1ku的离子或小分子物质通过,这是GJ执行各种生理功能的结构基础。连接子是由6个相同或不同的亚单位即Cx环绕排列成的中空小管,其外形如棒状,直径6～7nm。2GJ的功能

3、相邻细胞间通过GJ所介导的GJIC进行着信息、能量和物质的交换,参与细胞间物质交换的代谢偶联和电信号传递的电偶联,对细胞的新陈代谢、内环境稳定、增殖和分化等生理过程起着重要的调控作用。其生理功能主要有①心脏和神经元组织中动作电位的快速传导，其中Cx43单通道电导为60～100ps［1］;②细胞间代谢产物或营养物质和水分子的被动扩散，如核苷酸、ATP、葡萄糖等［2］；③细胞间各种离子或第二信使如Ca2+、三磷酸肌醇及环化核苷酸的交流［3］。3GJ功能的调节GJ通道的功能包括介导细胞间电耦联和化学耦联。评价GJ功能的方法主要有膜片钳技术和低分子染料通透试验。Cx43形成的G

4、J通道允许分子质量小于1000u和/或直径小于1.5nm的离子或小分子通过。由于GJ通道具有口径大、低选择性、开放稳定性及协作的双细胞结构等特点，因此GJ通道一般不被认为是通常意义上的离子通道，而被认为是具有自己独特结构、功能和特性的一种特殊通道。GJ通道的功能受多种因素的影响，这些因素主要有胞内pH值、Ca2+浓度、Cx的磷酸化状态、跨通道电压以及一些神经体液因子。胞内pH值降低可致GJ通道功能减弱甚至关闭，细胞间失去耦联。胞内Ca2+浓度下降时，GJ通道的电导呈剂量依赖性下降，而当胞内Ca2+浓度与pH值同时下降时，则电导下降更为明显［4～6］。4Cx434.1Cx

5、43的结构编码人类Cx43的基因位于6q22.3，全长约3.0kb。Cx基因家族是保守的，不同的Cx具有共同的结构特征。Cx43属于Cxα亚组，分子质量43ku，其蛋白质肽链由382个氨基酸构成，其中氨基酸1～242构成管道部分，243～382为细胞质尾部［7］。从氨基末端(N端至羧基末端(C端共出入细胞膜4次，形成2个胞外环和1个胞内环，4个α螺旋结构的跨膜片段，从N端至C端分别是M1～M4，N端和C端均位于细胞质内。Cx最为保守的区域是2个胞外环，其次是4个跨膜片段，N端保守性次于跨膜片段，亦为保守区域。胞内膨大的C端氨基酸数目和序列区别较大，是不同Cx的主要区别。

6、Cx43的细胞质尾部在不同种属和不同组织间长度稍有变化［8］。另外，Cx的大多数功能调节位点也在C端［9］。4.2Cx43的生命周期Cx43在SDS_PAGE上至少表现为P0～2等3条分子质量从40～46ku的区带。有时在P0和P1_Cx之间有1个次要的磷酸化条带P′；在有丝分裂细胞等还可以见到超磷酸化的Cx43条带P3。P0代表刚合成非磷酸化的Cx43，分子质量约40～42ku；P1代表部分磷酸化的Cx43，分子质量约43～44ku；P2代表高度磷酸化的Cx43，分子质量约46ku［10_11］。利用Cx43在电泳凝胶上移动性的改变，是判断其磷酸化较为简单和常用的方法

7、。通常情况下，Cx43首先在内质网合成，然后转运至高尔基复合体，最后在细胞膜上聚集形成GJ［12］，但在转运至细胞膜之前，是否有先形成寡聚体则仍不清楚。在应激条件下，GJ单位通过胞吞，被从斑块的中央加速移除，形成环状GJ，与胞吞小体结合，进而被溶酶体降解。Cx处于动态变化过程，Cx43的半衰期约1～3h［13］。较短的半衰期对快速调节通道数量具有重要意义。5GJ通道功能调节与CX43磷酸化状态的关系蛋白质磷酸化作用是真核细胞信号转导中的核心,通常磷酸化作为一个分子开关在不同通路如代谢、信号转导和细胞分裂等控制着蛋白质的活性,蛋白质的磷酸化