薄层层析技术快速定性检测食用油品中的胆固醇

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1、薄层层析技术快速定性检测食用油品中的胆固醇童淑芬1　熊豫麟2　贺　铭1（1.昆明医科大学基础医学院实验教学中心细胞与分子生物学实验室，云南昆明650500；2.昆明医科大学图书馆，云南昆明650500）【摘　要】提出了用薄层层析技术快速测定胆固醇含量鉴定地沟油的方法。实验结果表明，当标准胆固醇含量大于1μg时，可以明显观察到胆固醇染色点，且油品胆固醇含量随地沟油含量的增加而成线性增加，市售合格的食用植物油均未检测出胆固醇。据此实验结果特征，可作为判断食用植物油是否掺混地沟油的依据。.jyqkg/mL胆固醇标准液，4℃保存；50%氢氧化钾溶

2、液：称取50g氢氧化钾，用蒸馏水溶解定容至100mL。5%氯化钠溶液：称取5g氯化钠，用蒸馏水溶解定容至100mL；显色液：磷钼酸2.5g溶于冰乙酸100mL，再加浓硫酸5mL（临用前配制）。全部试剂均为分析纯，实验用水为去离子水。主要仪器：硅胶G薄层层析板（青岛海洋化工厂）、玻璃层析缸（上海楚定分析仪器有限公司）、电热恒温水箱（上海一恒科技有限公司）、漩涡混合器（上海精科实业有限公司）、电热恒温鼓风干燥箱（上海森信实验仪器有限公司）、佳能G9数码相机（佳能公司）。1.3　实验方法1.3.1　标准曲线绘制将胆固醇标准液等比稀释为2、1、0

3、.5、0.25、0.125mg/mL，用微量移液器各取5μL（相当于胆固醇标准上样量为10、5、2.5、1.25、0.625μg）点样于硅胶G薄层层析板上，置于层析缸展层。展开剂：异辛烷:醋酸乙酯为2:1(V/V)。待展开剂前沿升至层析板上端约1cm处，取出晾干层析板。将现配的显色剂均匀喷雾于层析板，待晾干后平置于85℃烤箱中加热，约15min后色斑成色。1.3.2　样品测定各取实验油品0.5mL，加入4mL无水乙醇，0.5mL50%氢氧化钾溶液，在65℃恒温水浴中皂化1h，皂化过程中每20min振摇一次，使之皂化完全。皂化完毕后，取出试

4、管，室温冷却。加入3mL5%氯化钠溶液，10mL石油醚，盖紧瓶盖，在电动振荡器上振摇2min，静置分层。取上层石油醚清液2mL于新试管中，置于65℃水浴中自然挥干，加入100μL冰乙酸溶解沉淀。用微量移液器取5μL点样于硅胶G薄层层析板，置于层析缸中展开，用显色剂呈色后，数码相机拍照后，利用ImageJ软件测算样品点的灰度值。根据标准曲线计算其胆固醇含量。1.3.3　计算测量胆固醇的迁移距离：用直尺测量点样点至各个色斑中心的距离（精确至毫米），再测量点样点至层析最前沿条带的距离。计算胆固醇迁移率（Rf）：胆固醇迁移率（Rf）=胆固醇色斑迁

5、移距离/前沿迁移距离。数码相机拍照后，利用ImageJ图像处理软件测算胆固醇样品点的灰度值。以胆固醇点样量为横坐标，样品点灰度值为纵坐标，制成标准曲线，并计算回归方程。2　结果2.1　胆固醇迁移率（Rf）=胆固醇色斑迁移距离/前沿迁移距离=80mm/154mm=0.542.2　胆固醇含量标准曲线回归方程y=0.5181x+0.0248R2=0.9932.3　直接皂化法时间和温度的选择在相同条件下，选择皂化时间为20、40、60、80min和皂化温度为50、55、60、65、70℃。结果表明，皂化时间60min和皂化温度65℃为最佳实验条件

6、。2.4　硅胶G薄层层析法样品测定从市场选购的四种食用植物油及地沟油样品进行测定，结果见图1。1号层析泳道：胆固醇标准样品（上样量1.25μg），箭头所指处为胆固醇层析结果；2-5号层析泳道分别为所购大豆油、菜籽油、花生油、调和油油品层析结果；6号层析泳道为地沟油层析结果。从图1中可以看出，2-6号层析泳道离上样点最近的色斑与1号层析泳道的标准胆固醇色斑位置一致，证明均为胆固醇色斑，6号泳道色斑灰度值明显大于2-5号泳道的色斑，说明各油品经直接皂化法提取的胆固醇中，地沟油样品的胆固醇含量明显高于超市所购食用植物油的胆固醇含量。3　讨论本文

7、采用直接皂化法提纯油品中的胆固醇，再通过硅胶G薄层层析法分离测定胆固醇含量，由此得到了满意的效果。此技术的优点在于：实验仪器设备廉价；操作简单、快速，无需过多的专业培训；取样量少，油品经过直接皂化后即可进行测定，简化了操作程序；实验结果可靠，便于基层检验人员开展地沟油筛查工作。（下转第２４４页）..