桂郁金水提物对小鼠出血与凝血时间的影响

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1、桂郁金水提物对小鼠出血与凝血时间的影响【关键词】桂郁金;凝血时间;出血时间  桂郁金于姜科植物广西莪术Curcumakoxide(Ⅳ)、isozedoarondiol(Ⅴ)、curcumenol(Ⅵ)和β2谷甾醇(Ⅶ)[3]。桂郁金为广西产大宗中药材,近几年产量约占全国郁金总产量的60%以上,对我国市场有较大的影响力。但其活性的物质基础和作用机制研究报道却很少。其止血与凝血作用也未见报道。我们对桂郁金水提物的止血与凝血活性进行了初步的探究。现报道如下。  1材料和方法  1.1动物、药品和试剂昆明种小鼠,雌雄各半,由广西医科大学实验动物中心提供(合格证号:

2、SCKX桂2003-0001)。云南白药(云南白药集团股份有限公司,批号20061020)。  1.2桂郁金的提取方法[3]将桂郁金原药材(2008-08采自广西钦州市灵山县陆屋镇,经南宁市药品检验所鉴定)捣成碎块,称取2.0kg,水浸泡2h后,煎煮两次,1h/次,滤过,合并滤液,用95%的乙醇沉淀,静置24h后滤过,合并滤液,旋转蒸发仪减压浓缩得桂郁金水提物,冰箱放置,备用。  1.3急性毒性实验根据改良寇氏法,首先将配置好的药液稀释成不同浓度,进行预试验,测定小鼠死亡率在0%~100%的剂量范围。根据预试验的结果,将50只小鼠随机分成5组,按体质量1次

3、给药,以不同浓度的药液剂量按0.2ml·10g-1灌服,连续观察14d,记录小鼠中毒症状、死亡数,观察死亡小鼠内脏器官的变化情况。用改良寇氏法计算桂郁金水提物的LD50及其95%的可信限。  1.4出血时间的测定(剪尾法)[4,5]将小鼠随机分成5组,分别一次性灌胃给予高(32g·kg-1)、中(16g·kg-1)、低(8g·kg-1)的桂郁金水提物、云南白药(10g·kg-1)和生理盐水,1h后按0.1ml/10g腹腔注射0.7%硫喷妥钠,待小鼠完全进入麻醉状态后,用解剖剪距小鼠尾尖3mm处横剪断,待血液自行溢出计时,每30秒用滤纸吸血1次,直至血液自然

4、停止所需的时间即为该鼠的出血时间。另将小鼠随机分成5组,分别灌胃给以高(32g·kg-1)、中(16g·kg-1)、低(8g·kg-1)的桂郁金水提物、云南白药(10g·kg-1)和生理盐水,连续灌胃5d,1次/d,末次给药1h后,按上述方法测定小鼠的出血时间。  1.5凝血时间的测定(毛细玻管法)[5,6]将小鼠随机分成5组,分别灌胃高、中、低桂郁金水提物、云南白药和生理盐水,连续灌胃5d。末次给药1h后用内径1mm,长10cm的玻璃毛细管插入小鼠左眼内球后静脉丛取血,血液注满后取出,平放于桌面每隔30秒折断毛细玻管约0.5cm,并缓慢左右拉开,观察折断

5、处是否有凝血丝,自血液流入毛细管内开始计时,至血凝丝出现为止,所历时间为毛细管该端凝血时间。另将小鼠随机分成5组,分别一次灌胃给以高、中、低桂郁金水提物、云南白药和生理盐水,1h后按照以上方法测定凝血时间。  1.6凝血时间的测定(玻片法)[5,6]将小鼠随机分成5组,分别灌胃高、中、低桂郁金水提物、云南白药和生理盐水,连续灌胃5d,末次给药1h后用毛细管于小鼠左眼内球后静脉丛取血,滴两滴在玻片上并同时计时,每30秒用清洁针头在玻片上挑血丝一次,当有血丝出现时计时完毕,即得凝血时间。另将小鼠随机分成5组,分别一次灌胃给以高、中、低桂郁金水提物、云南白药和生

6、理盐水,1h后按照以上方法测定凝血时间。  1.7统计处理  数据以±s表示,用MicrosoftExcel进行数据处理,统计分析采用t检验。  2结果  2.1急性毒性试验经预试验测得该药的毒性剂量范围约为100~320g·kg-1,相邻两组剂量之间的比例为r=1∶0.8较为合适。根据预试结果,设计正式实验各组的剂量,分别为:104.9g,131.1g,163.8g,204.8g,256.0g/kg,以0.2ml·10g-1的剂量一次性灌胃给予10只小鼠。结果见表1。表1桂郁金水提物对各组小鼠用药、死亡情况(略)  2.3桂郁金水提物对小鼠凝血时间的影响

7、从表3中可以看出给小鼠灌胃1次,用玻片法观察到剂量为32g·kg-1、16g·kg-1时,与空白组比较凝血时间无明显差异;剂量为8g·kg-1时,与空白组比较P<0.05,凝血时间明显缩短。用毛细管法观察,与空白组比较各剂量组凝血时间无显著性差异。从表4可以看出给小鼠给药5d,用玻片法和毛细管法观察,与空白组对比,3个剂量组的凝血时间均无显著差异,但高、中、低剂量组的凝血时间都有缩短的趋势。表3桂郁金水提物一次性给药对小鼠凝血时间的影响,表4桂郁金水提物连续5次给药对小鼠凝血时间的影响(略)  3讨论  出血时间是指穿破毛细血管,自出血到自然止血所需要的时

8、间。其长短与毛细血管功能、组织收缩力、组织因子、血小板的数量和功能

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