桂郁金水提物对小鼠出血与凝血时间的影响

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　　桂郁金水提物对小鼠出血与凝血时间的影响【关键词】桂郁金；凝血时间；出血时间　　桂郁金于姜科植物广西莪术Curcumakoxide(Ⅳ)、isozedoarondiol(Ⅴ)、curcumenol(Ⅵ)和β2谷甾醇(Ⅶ)［3］。桂郁金为广西产大宗中药材，近几年产量约占全国郁金总产量的60%以上，对我国市场有较大的影响力。但其活性的物质基础和作用机制研究报道却很少。其止血与凝血作用也未见报道。我们对桂郁金水提物的止血与凝血活性进行了初步的探究。现报道如下。　　1材料和方法　　1.1动物、药品和试剂昆明种小鼠,雌雄各半，由广西医科大学实验动物中心提供（合格证号：SCKX桂2003-0001）。云南白药（云南白药集团股份有限公司，批号20061020）。　　1.2桂郁金的提取方法［3］将桂郁金原药材（2008-08采自广西钦州市灵山县陆屋镇，经南宁市药品检验所鉴定）捣成碎块，称取2.0 kg，水浸泡2h后，煎煮两次，1h/次，滤过，合并滤液，用95%的乙醇沉淀，静置24h后滤过，合并滤液，旋转蒸发仪减压浓缩得桂郁金水提物，冰箱放置，备用。　　1.3急性毒性实验根据改良寇氏法,首先将配置好的药液稀释成不同浓度,进行预试验，测定小鼠死亡率在0%～100%的剂量范围。根据预试验的结果,将50只小鼠随机分成5组，按体质量1次给药，以不同浓度的药液剂量按0.2ml·10g-1灌服,连续观察14d，记录小鼠中毒症状、死亡数，观察死亡小鼠内脏器官的变化情况。用改良寇氏法计算桂郁金水提物的LD50及其95%的可信限。　　1.4出血时间的测定（剪尾法）［4，5］将小鼠随机分成5组，分别一次性灌胃给予高（32g·kg-1）、中(16g·kg-1)、低(8g·kg-1)的桂郁金水提物、云南白药（10g·kg-1）和生理盐水，1h后按0.1ml/10g腹腔注射0.7%硫喷妥钠，待小鼠完全进入麻醉状态后，用解剖剪距小鼠尾尖3mm处横剪断，待血液自行溢出计时，每30秒用滤纸吸血1次，直至血液自然停止所需的时间即为该鼠的出血时间。另将小鼠随机分成5组，分别灌胃给以高（32g·kg-1）、中(16g·kg-1)、低(8g·kg-1)的桂郁金水提物、云南白药（10g·kg-1）和生理盐水，连续灌胃5d，1次/d，末次给药1h后，按上述方法测定小鼠的出血时间。　　1.5 凝血时间的测定（毛细玻管法）［5，6］将小鼠随机分成5组，分别灌胃高、中、低桂郁金水提物、云南白药和生理盐水，连续灌胃5d。末次给药1h后用内径1mm，长10cm的玻璃毛细管插入小鼠左眼内球后静脉丛取血，血液注满后取出，平放于桌面每隔30秒折断毛细玻管约0.5cm，并缓慢左右拉开，观察折断处是否有凝血丝，自血液流入毛细管内开始计时，至血凝丝出现为止，所历时间为毛细管该端凝血时间。另将小鼠随机分成5组，分别一次灌胃给以高、中、低桂郁金水提物、云南白药和生理盐水，1h后按照以上方法测定凝血时间。　　1.6凝血时间的测定（玻片法）［5，6］将小鼠随机分成5组，分别灌胃高、中、低桂郁金水提物、云南白药和生理盐水，连续灌胃5d，末次给药1h后用毛细管于小鼠左眼内球后静脉丛取血，滴两滴在玻片上并同时计时，每30秒用清洁针头在玻片上挑血丝一次，当有血丝出现时计时完毕，即得凝血时间。另将小鼠随机分成5组，分别一次灌胃给以高、中、低桂郁金水提物、云南白药和生理盐水，1h后按照以上方法测定凝血时间。　　1.7统计处理　　数据以±s表示，用MicrosoftExcel进行数据处理，统计分析采用t检验。　　2结果　　2.1急性毒性试验经预试验测得该药的毒性剂量范围约为100～320g·kg-1， 相邻两组剂量之间的比例为r=1∶0.8较为合适。根据预试结果，设计正式实验各组的剂量，分别为：104.9g，131.1g，163.8g，204.8g，256.0g/kg，以0.2ml·10g-1的剂量一次性灌胃给予10只小鼠。结果见表1。表1桂郁金水提物对各组小鼠用药、死亡情况（略）　　2.3桂郁金水提物对小鼠凝血时间的影响从表3中可以看出给小鼠灌胃1次，用玻片法观察到剂量为32g·kg-1、16g·kg-1时，与空白组比较凝血时间无明显差异；剂量为8g·kg-1时，与空白组比较P＜0.05，凝血时间明显缩短。用毛细管法观察，与空白组比较各剂量组凝血时间无显著性差异。从表4可以看出给小鼠给药5d，用玻片法和毛细管法观察，与空白组对比，3个剂量组的凝血时间均无显著差异，但高、中、低剂量组的凝血时间都有缩短的趋势。表3桂郁金水提物一次性给药对小鼠凝血时间的影响，表4桂郁金水提物连续5次给药对小鼠凝血时间的影响（略）　　3讨论　　出血时间是指穿破毛细血管，自出血到自然 止血所需要的时间。其长短与毛细血管功能、组织收缩力、组织因子、血小板的数量和功能、纤溶等因素有关，其中影响最大的是血小板和毛细血管功能［7］。凝血时间是指血液自离体至凝固所需要的时间，血液离体后，接触带阴电荷的表面如玻璃器材时，Ⅻ凝血因子被激活，其后一系列凝血因子相继活化，最后使纤维蛋白原转变为纤维蛋白而凝血，其时间的长短主要与各种凝血因子的含量和功能有关［7］。　　本文对桂郁金水提物对小鼠出血时间和凝血时间的影响进行了实验研究，发现桂郁金水提物可缩短小鼠出血时间，但与桂郁金水提物用量和用药时间有关。桂郁金水提物对小鼠凝血时间有缩短的趋势。实验结果表明在一定的剂量范围，桂郁金水提物具有缩短出血时间和凝血时间的作用，提示桂郁金水提物可能具有止血作用。但止血作用是一个复杂的生理过程，影响止血的因素很多，例如：凝血因子、纤溶系统、血管状态、血小板等［7］，因此桂郁金的止血作用的机理需要进一步深入研究。　　急性毒性实验发现桂郁金水提物的LD50=170.9原生药g·kg-1，表明其毒性很小。【参考文献】　　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005，附录I：144. 　　［2］兰凤英.郁金的药理作用及临床应用.长春中医药大学学报［J］.2009，25(1)：27.　　［3］葛跃伟，高慧敏，王维皓，等.桂郁金化学成分研究Ⅰ［J］.中国药学杂志，2007，42(11)：822.　　［4］高英，李卫民，荣向路，等.防风超临界提取物的止血作用［J］.中草药，2005，36(2)：254.　　［5］曲香芝，崔弘，陈正爱.不同炮制法的淫羊藿提取物对小鼠出血和凝血时间的影响［J］.时珍国医国药，2007，18(4)：118.　　［6］何红，车庆明，孙启时.地龙提取物的抗凝血作用［J］.中草药，2007，38(5)：733.　　　［7］王鸿利.止血与凝血机制研究进展［J］.继续医学教育，2006，20(26)：13.