跨膜型与分泌型tnf

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1、跨膜型与分泌型TNF【关键词】跨膜型【摘要】目的研究和比较跨膜型肿瘤坏死因子-α（transmembranceTNF-α，mTNF）和分泌型TNF-α（secretedTNF-α，sTNF）对细胞毒T淋巴细胞（cytotoxicTlymphocyte，CTL）功能的影响。方法采用单向混合淋巴细胞培养的方法，获取针对同种异体MHC分子的CTL。结果相同的刺激细胞经ConA刺激后作为靶细胞，成功建立了CTL实验模型;混合培养白细胞（mixedleukocyteculture，MLC），与靶细胞作用后，两型TNF-α均有表达:mTNF-α表达增加约2倍（

2、P<0.05），sTNF-α增加3倍（P<0.05）;MLC与抗TNF-α抗体预先作用，再加入靶细胞，该抗体不能有效阻断其杀伤作用;相同剂量两型外源性TNF-α与MLC作用24h后，对MLC的杀伤作用不明显。结论两型外源性TNF-α对MLC作用差异无显著性。关键词跨膜型肿瘤坏死因子分泌型肿瘤坏死因子细胞毒T淋巴细胞Effectofsecretedandtransmembranetumornecrosisfactor-αonthefunctionsofhumanMLC【Abstract】ObjectiveTostudyandparethe

3、effectofmTNF-αandsTNF-αonthecytotoxicfunctionofCTL.MethodsCTLspecificforallogenicMHCixedlymphocytesculture.ResultsEx-perimentalmodelofCTLusedastargetcellsulatedbyConA.ThetsofTNF-αTNF-αelevatedby2folds（P<0.05）vssTNF-αele-vatedby3folds（P<0.05）.AfterprimedsofexogenousTNF-αi

4、nsamedose.ConclusionThecytotoxiceffectofthetsofTNF-αontheMLCisinapparent.KeyembraneTNF-αsecretedTNF-αcytotoxicTlymphocytesTNF-α是由激活的单核/巨噬细胞、细胞毒T淋巴细胞（cytotoxicTlymphocyte，CTL）等分泌产生的一种重要的细胞因子。TNF-α分布广泛，几乎表达于所有正常及多种肿瘤细胞表面［1］，由此也决定了TNF-α广泛的生理活性。TNF-α有两种存在形式，即26kD的跨膜型和17kD的分泌型，前者为后

5、者的前体［2］。CTL是机体细胞免疫应答中重要的效应细胞，它广泛地参与机体的抗肿瘤、抗病毒及胞内菌感染以及移植排斥反应等免疫过程。它有两个基本的细胞毒机制:通过胞吐作用分泌穿孔素颗粒酶等，直接对靶细胞进行杀伤，或是通过表达FasL、TNF等，与靶细胞表面相应的受体作用，诱导靶细胞凋亡或坏死［3］。目前国内外关于TNF-α对CTL作用的研究主要集中在TNF-α对CTL发育成熟的影响，关于TNF-α对活化的效应性CTL杀伤功能的研究则较少，而且这些研究几乎都是针对sTNF-α进行的。有关mTNF-α对效应性CTL细胞毒功能的影响则未见报道。本课题研究m

6、TNF-α和sTNF-α对CTL细胞毒功能影响的异同，以期阐明跨膜型和分泌型TNF-α生物学特征及生物学作用的规律。根据临床需要，通过改变该细胞因子类型而对CTL功能进行调控，从而为临床治疗有关疾病提供新的线索及实验依据。1材料与方法1.1材料RPMI1640干粉，DMEM干粉（GIBCO，美国）;淋巴细胞分离液（上海试剂二厂）;胎牛血清及新生牛血清（杭州四季青）;丝裂霉素C（Kyoerisco，美国）;小鼠抗人CD3，CD4，CD8单克隆抗体（武汉生物制品研究所）;FITC标记的羊抗小鼠IgG，FITC标记的羊抗兔IgG及人肿瘤坏死因子酶联免疫试

7、剂盒（博士德公司，美国）;凋亡检测试剂盒（Uomed公司，美国）;兔抗人TNF-α多克隆抗体（本室自备）;NIH3T3;表达mTNF-α的转基因NIH3T3（是本实验室已经建立好的mTNF-α的实验模型）。1.2方法1.2.1人MLC及其靶细胞的获取［4］常规分离获取两个无关个体的新鲜外周血中的外周血单核白细胞（peripheralbloodmononuclearcells，PBMC），一份通过贴壁去掉单个核细胞，获取淋巴细胞，作为反应细胞，另一份PBMC中加入丝裂霉素C溶液，37℃温浴30min，作为刺激细胞。加入rhIL-2（10ng/ml），

8、5%CO237℃孵育7天，收获混合培养白细胞（mixedleukocyteculture，MLC），即为CTL的实验模型。