inos抑制剂对兔关节软骨修复组织胶原表达的影响

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1、iNOS抑制剂对兔关节软骨修复组织胶原表达的影响作者：孙炜王吉兴金大地刘晓霞刘安庆【摘要】目的观察诱导型一氧化氮合酶抑制剂对关节软骨修复组织胶原表达的影响。方法24只新西兰大白兔双侧股骨髁间关节面造成全层软骨缺损。随机抽签均分为对照组、骨形态发生蛋白(bonemorphogeicprotEin，BMP)组和一氧化氮合酶抑制剂S²甲基异硫脲组(S²methylisothiourea，SMT)组。术后1年处死动物。应用苦味酸²天狼猩红染色检测胶原的分布情况，图像分析技术定量胶原的表达及进行修复组织软骨厚度的测量。应用免疫组织化学

2、技术检测Ⅱ型胶原的表达和分布。结果图像分析显示，1年后SMT组Ⅰ型胶原表达量为65.9％，明显少于BMP组88.5％和对照组94.6％的表达量，Ⅱ型胶原30.7％的表达量明显多于BMP组10.8％和对照组4.5％的表达量。1年后SMT组软骨厚度(1.85±0.56)mm明显高于BMP组(0.67±0.31)mm和对照组(0.24±0.10)mm。SMT组缺损区Ⅱ型胶原含量明显高于BMP组和对照组。结论iNOS抑制剂SMT的应用能明显增加Ⅱ型胶原表达和软骨厚度，对于维持软骨表型有积极意义。【关键词】一氧化氮酶抑制剂软骨S²甲基异硫脲胶原Abstr

3、act：ObjectiveTodiscusseffectofcollagenexpressioninarticularcartilagerepairetissuebyinduciblenitricoxidesynthaseinhibitorSMT.MethodsFull²thicknessdefectsofcartilagepty，eightpregnatedpregnatedicinjectiong/kg²1/12h²1SMT.Theanimalsent500.CartilagethicknesseasuredbyQuan

4、timent500too.ResultsOne²yearaftercollagenfibringlueicinjectionSMT，collagentype²ⅠexpressionofrepairtissueinSMTgroup(65.9％)orethaninBMPgroup(10.8％)andthecontrol(4.5％).CartilagethicknessofSMTgroup(1.85±0.56)mmmandthecontrol(0.24±0.10)mm.ConclusionNOSinhibitorSMTcouldincrea

5、secollagentype²Ⅰexpressionanddecreasecollagentype²Ⅱexpression，asakephenotypegood.Keyethylisothiourea；collagen一氧化氮(nitricoxide，NO)是活泼的自由基分子，参与多种组织的代谢调节。关节软骨自身修复能力十分有限，关节软骨损伤通常会导致更严重的关节软骨退变，既往研究已采用多种方法来修复和重建关节软骨，许多技术已被广泛应用于临床。而一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase，NOS)抑制剂有助于软骨组织修复。因

6、此本文应用苦味酸²天狼猩红染色，研究软骨修复组织中胶原纤维的表达变化，了解NOS抑制剂对软骨修复组织胶原表达的影响。1材料与方法1.1研究对象与实验分组实验于1999年6月至2001年2月在南方医科大学完成。取8个月龄新西兰兔24只，雄性，体重(2.5±0.2)kg。随机抽签法分为对照组、骨形态发生蛋白组(bonemorphogenticprotein，BMP)和诱导型一氧化氮合酶抑制剂S²甲基异硫脲(S²methylisothiourea，SMT)组，动物由南方医科大学提供。动物模型和标本处理：8月龄新西兰兔24只，随机分

7、为对照组、BMP组和SMT各8只。在右侧股骨髁间关节面上作直径4.5mm、深达髓腔的全层缺损。a)对照组：软骨缺损不充填任何物质；b)BMP组：缺损用BMP纤维蛋白凝胶复合物充填；c)SMT组：缺损应用胶原复合BMP充填，术后按5mg·kg－1·12h－1皮下注射SMT。术后1年各组处死动物，制作石蜡切片用于检测。1.2苦味酸²天狼猩红染色显示胶原分布：石蜡切片，0.1％的天狼猩红饱和苦味酸溶液(0.1g天狼猩红溶于100mL苦味酸溶液)染60min，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，封片。偏振光显微镜下观察。1.3软骨Ⅰ、Ⅱ型胶原图像分析在40倍视野

8、下，每张切片上选择10个纵向视野，以正常软骨Ⅰ、Ⅱ型胶原色度为参照。利用Leic