阿司匹林对宫颈癌hela细胞cox

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1、阿司匹林对宫颈癌Hela细胞COX【摘要】　　目的研究COX-2非选择性抑制剂阿司匹林（Aspirin）对宫颈癌细胞株Hela的细胞增殖的抑制作用及COX-2mRNA表达量的影响。方法Hela细胞分4组培养在6孔板上设对照组及实验组,观察不同剂量阿司匹林作用后细胞的增殖状态及采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测阿司匹林作用前后Hela细胞COX-2mRNA量的变化。结果阿司匹林能抑制Hela细胞增殖及细胞中COX-2mRNA的转录，且抑制强度随阿司匹林的浓度的提高而增加。结论体外阿司匹林抑制癌细胞Hela生长，并从mRNA水平抑制COX-2蛋白的表达，对宫颈癌可能有潜在治疗

2、意义。【关键词】阿司匹林环氧合酶-2宫颈癌Hela　　【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectofthenon-selectiveinhibitoraspirinontheproliferationofcervicalcancercellsandonthetranscriptionofCOX-2mRNAinvitro.MethodsHelacellsicroscope.ThequantityofCOX-2mRNAeasuredbyusingreverse-transcriptionpolymerasechainreaction(RT-PCR

3、).ResultsAspirincaninhibitproliferationofHelacellsandCOX-2mRNAtranscriptionandtheeffectRNA的提取：Hela细胞按每孔2×105接种在孔径为3cm的6孔板内，培养至细胞贴壁，分3组：对照组（常规MEM培养基），A1组（阿司匹林100μmol/L的MEM培养基），A2组（阿司匹林1mmol/L的MEM培养基），每组设3个复孔，48h后观察细胞生长状态及提取细胞用于实验。(3)Trizol提取总RNA：按Trizil产品说明书提取总RNA，用紫外分光光度计检测总RNA，当比值达到260/280比为1

4、.6～1.9时，可用于RT-PCR实验。(4)RT-PCR测定COX-2mRNA：RT-PCR采用两步法扩增，扩增条件为变性94℃、延伸72℃、退火57℃，共30个循环，扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳后在凝胶成像系统下观察结果，用凝胶影像软件分析DNA条带中COX-2与内对照产物GAPDH的比值。　　1.3统计学处理采用SPSS13.0软件，数据以(x±s)表示，显著性检验采用单因素方差分析。以P＜0.05为差异有显著性。　　2结果　　2.1细胞形态学改变阿司匹林作用的细胞15h起与对照组相比细胞生长状态有改变，细胞透光差，部分细胞漂浮死亡，且随着药物浓度的增加，细胞生长受抑情况加重。

5、至48hA2组细胞数较A1组及对照组明显减少(图1、2)。　　2.2COX-2mRNA表达量的改变三组细胞，提取总RNA逆转录及PCR扩增特异反应产物后，经琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像系统显示扩增反应条带状(图3)。用软件分析COX-2条带和GAPDH条带光密度之比，对照组为=15.76±1.03，A1组为9.37±1.2，A2组为6.51±0.86，A1及A2组的相对光密度较对照组减少，A2组尤显著，可见随着阿司匹林浓度增加，COX-2mRNA条带相对光密度呈减少的趋势，对照组与A1、A2组比较及A1与A2组比较，差异均有显著性(F=62.293,对照组与A1组比较P=0.000，对

6、照组与A2比较p=0.000，A1组与A2组比较P=0.015）。　　3讨论　　环氧合酶包括两个亚型COX-1和COX-2，是前列腺素(PG)合成的限速酶,催化合成的PG参与多种病理过程。研究发现,COX参与多种肿瘤的形成和发展［１］,尤其是COX-2,从影响细胞凋亡、参与促进血管形成和肿瘤浸润等方面促进肿瘤发展。通常,COX-2在癌细胞中有高表达,但也有几种肿瘤中低表达,如胰腺癌和乳腺癌［２］。所以，在临床试验中要考虑肿瘤类型的差异。　　阿司匹林是COX的非选择性抑制剂,属非甾体抗炎药(NSAIDs)，具有预防和抑制上皮性恶性肿瘤的作用。Rao等［３］发现NSAIDs可通过抑制C

7、OX和NOS-2激活来抑制结肠癌的发展。最新研究表明阿司匹林结合放射治疗可诱导癌细胞凋亡,并明显提高宫颈癌HelaTG细胞的化疗敏感性，化疗前应用1mM阿司匹林可增加凋亡细胞比率及提高放疗效应［４］。但NSAIDs在癌细胞中的效应除了被COX-2所调节，也和COX-2的下游效应分子相互作用。肿瘤细胞具有释放免疫抑制因子产生免疫耐受及免疫逃逸现象的功能，Lang等［５］研究发现，肿瘤细胞通过抑制免疫细胞的生理功能产生免疫抑制，阿司匹林能恢复免疫细胞的生理功能，从而达到抗