pcr方法联合酶联免疫吸附试验检测肺炎支原体感染的临床价值

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1、PCR方法联合酶联免疫吸附试验检测肺炎支原体感染的临床价值青州市人民医院摘要：目的：观察和评价分析肺泡盥洗液PCR方法联合酶联免疫吸附试验(ELISA)在肺炎支原体感染检测中的临床意义。方法：选取对我院2014年12月一2016年7月期间住院的200例获得性肺炎病人分别采用血清ELISA方法和肺泡盥洗液PCR方法检测肺炎支原体(MP)，并对两种方法检验结果的敏感性和差异性。结果：血淸EUSA法和肺泡盥洗液PCR法检测肺炎支原体感染阳性20例和18例敏感性分别为83.33%、75.0%,通过两组方法肺炎支原体感染阳性180例和182例，检测特异性分别为98.33%、97.2

2、5%。两种方法在检测肺炎支原体感染屮敏感性及特异性的差异无统计学意义(P>；0.05)o结论：通过采用泡盥洗液PCR方法联合酶联免疫吸附试验(ELISA)检测可提高诊断阳性率，对早期诊断支原体肺炎有重要临床意义，值得临床推广应用。关键词：PCR方法；酶联免疫吸附试验；肺炎支原体感染支原体肺炎(mycoplasmalpneumonia)是由肺炎支原体引起的急性呼吸道感染伴肺炎，过去称为原发性非典型肺炎。肺炎支原体进人人体常导致上呼吸道带菌状态或感染，部分患者可发生多种类型的肺炎、胸膜炎。本病潜伏期2〜3周，起病缓慢，约1/3病例无症状。可以气管一支气管炎、肺炎、耳鼓膜炎

3、等的形式出现，而以肺炎最重［1］。选取对我院2014年12月一2016年7月期间住院的200例肺炎支原体感染患者进行临床观察和分析，现报告如下。1资料及方法1.1一般资料选取对我院2014年12月一2016年7月期间住院的200例成人社区获得性肺炎病人，其屮男病人128例，女病人72例，年龄20-75岁，平均年龄46.2岁。1.2诊断标准肺炎支原体肺炎的诊断标准是如下［2】。（1）青少年或老年患者于发病季节出现顽固的刺激性干咳，发热体征不明显，常规应用青霉素和头孢菌素等B-内酰胺类抗生素无效，应考虑肺炎支原体肺炎可能。（2）本病冇自限性，多数病例不经治疗可自愈。临床表现轻

4、、影像学表现重。仅极少数患者出现严重的肺外表现。（3）血清肺炎支原体抗体检查有助于进一步确诊，如急性期IgM阳性，恢复期IgG滴度≥l:64或4倍升高。（4）呼吸道标本培养分离出肺炎支原体是诊断的金标准，但检出率低，技术条件高，所需吋间长。（5）本病应与病毒性肺炎、肺炎球菌肺炎、肺炎支原体肺炎、军团菌肺炎、真菌性肺炎和肺结核等鉴别。1.3检验方法病人分别采用血清EUSA方法和肺泡盥洗液PCR方法检测肺炎支原体（MP）并对两种方法检验结果的敏感性和差异性。模板DNA:从公司购买的试剂：10×PCR缓冲液：dNTP混合物（2.5mmol/L）;TaqDNA聚

5、合酶（5IU/μl）;引物（10pmol/μl）o器材:DNA扩增仪;PCR小管;移液器及枪头。按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。先将针对IgM的第二抗体（如羊抗人IgM肛链抗体）连接于固相载体，用以结合（“捕获”）样品中所冇IgM（特异或非特异），洗涤除去IgG等无关物质，然后加入特异抗原与待检IgM结合；再加入抗原特异的酶标抗体，最后形成固相二抗-IgM-抗原-酶标抗体复合物，加酶底物作用显色后，即可对样品中待检IgM是否存在及其含量进行测定1.4统计学处理采用数理统计软件SPSS19.0对收集数据进行整理与统计分析，计量资料运用标准差表示，进行t

6、检验，计数资料运用％表示，进行卡方检验，P<0.05显着差异具有统计意义。2结果血清ELISA法和肺泡盥洗液PCR法检测肺炎支原体感染阳性20例和18例敏感性分别为83.33%、75.0%,通过两组方法肺炎支原体感染阳性180例和182例，检测特异性分别为98.33%、97.25%。两种方法在检测肺炎支原体感染中敏感性及特异性的差异无统计学意义（P>；0.05）o表1200例获得性肺炎支原体检测结果3讨论酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA）是在酶免疫技术（immunoenzymatictechniques

7、）的基础上发展起来的免疫测定技术，为固相酶免疫测定。其基本原理是将已知抗原或抗体结合到某种固相载体表面并保持其免疫活性，测定吋把受检标本和酶标抗原或抗体按一定程序与固相载体表面的抗原或抗体起反应形成抗原抗体复合物。反应后，通过洗涤的方法使抗原抗体复合物与其他游离物质分离。通过抗原抗体复合物结合在固相载体上的酶量与标本中受检物的量成一定的比例。加入底物显色，根据颜色反应深浅及艽吸光度值的大小进行定性或定量分析。EUSA法常用的标记酶是辣根过氧化酶（HRP）和碱性磷酸酶（ALP）,相应的底物分别为邻苯二胺（OPD）和对硝基苯磷酸盐