红颜草莓离体培养技术初探

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1、红颜草莓离体培养技术初探摘要：本文以红颜草莓叶片和匍匐茎为外植体，进行无毒苗离体培养，通过不同灭菌和诱导处理，得出组织培养方法诱导草莓植株再生的适宜方案。结果表明，幼嫩叶片和匍匐茎分别采用75%酒精浸泡20s和30s后用无菌水漂洗3遍，0.1%升汞消毒5min后用无菌水漂洗5遍后再用滤纸迅速吸干接种，获得无菌株成功率达90%以上；叶片诱导分化适宜培养基为6-BA0.2mg/L+IBA0.1mg/L+GA30.1mg/L；匍匐茎尖诱导分化适宜培养基为6-BA0.1mg/L+IBA1mg/L。.jyqk和幼嫩的叶片，分别用1%洗洁精水溶液浸泡5min，并用玻璃棒

2、轻微搅动后，再用自来水冲洗30min，无菌水冲洗1遍后移入超净工作台。根据表1对不同外植体进行灭菌处理，将匍匐茎尖和叶片分别放入灭菌烧杯中。倒入75%酒精分别浸泡20s、30s，无菌水冲洗3次，转入0.1%升汞溶液轻微搅动4min、5min、8min，用无菌水冲洗5次，用滤纸迅速吸干水分。各处理分别接种50个外植体，10d后统计外植体数量，并对外植体损伤情况进行统计。1.3诱导分化培养1.3.1叶片离体再生将消毒后的叶片切成5mm左右小块作为外植体，诱导培养基MS为基础培养基，附加不同植物生长调节剂浓度配比（见表2）。每瓶放置1片外植体，放置于恒温培养室，在

3、22~25°C，光照2000-3000Lx，光照时间16h条件下进行培养，2周后叶片周围出现愈伤组织，30d后有绿色芽点。1.3.2匍匐茎尖诱导分化在超净工作台上，40倍显微镜下，剥取匍匐茎尖（带1~2个叶原基）。按照表3对匍匐茎尖诱导分化处理，每瓶接种1个茎尖外植体，接种好后放置于恒温培养室，在温度22~25°C，光照2000~3000Lx，光照时间16h条件下进行培养，仔细观察生长情况发现，在1周后绿点慢慢长大，4周后出现丛生芽点。2结果与分析2.1不同外植体灭菌结果草莓的幼嫩叶片和匍匐茎都能诱导分化，从表4可以看出，叶片采用A2处理时外植体灭菌效果好，

4、损伤程度低。匍匐茎采用A5外植体灭菌效果好，损伤程度低。即：叶片采用75%酒精浸泡20s，用无菌水漂洗3遍，0.1%升汞消毒5min后用无菌水漂洗5遍处理效果较好；匍匐茎采用75%酒精浸泡30s，用无菌水漂洗3遍，0.1%升汞消毒5min后用无菌水漂洗5遍的处理效果较好。2.2不同外植体诱导分化结果从表5可以看出，B1、B2、B3丛生的芽点少，诱导率低于50%，而叶片诱导分化B4芽点多，长势良好，B6芽点也多，但B6出现幼苗有轻度的玻璃化，因此，以B4最好。从表6可以看出，C1、C2的诱导率偏低，C4、C5、C6的诱导率低于90%，C3匍匐茎诱导分化大于90

5、%，芽点状态较好，因此，以C3处理诱导分化效果较好。3小结（1）本文研究表明，叶片采用75%酒精浸泡20s，用无菌水漂洗3遍，0.1%升汞消毒5min后用无菌水漂洗5遍后用滤纸迅速吸干接种，成功率达到90%以上，匍匐茎采用75%酒精浸泡30s，用无菌水漂洗3遍，0.1%升汞消毒5min后用无菌水漂洗5遍后用滤纸迅速吸干接种，成功率达到93%以上。（2）细胞分裂素能促进植物体细胞的分裂以及器官诱导生长，从而对不定芽的产生获得积极的影响，叶片诱导分化以B4最好，即叶片诱导培养基6-BA0.2mg/L+IBA0.1mg/L+GA30.1mg/L。匍匐茎诱导分化C3

6、最好，即6-BA0.1mg/L+IBA1mg/L。.jyqk].上海科学普及出版社，2000，9.[2]杨秀娟，赵晓燕，马越，等.花青素研究进展[J].中国食品添加剂.2005，4：40-42.[3]姜卓俊.山东草莓种植业发展之我见[J].科技致富向导.2010（003）：6-7.[4]张宁，胡宗利，陈绪清，等.植物花青素代谢途径分析及调控模型建立[J].中国生物工程杂志.2008，28（1）：41-44.[5]张志宏，肖敏，杨洪一，等.草莓病毒脱除方法的比较与评价.果树学报[J].2006，23（5）：720-723.[6]周厚成，何水涛.草莓病毒病的研究

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