湖北麦冬茎尖离体培养技术研究

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1、湖北麦冬茎尖离体培养技术研究何家涛,赵劲松,别运清,瞿宏杰【关键词】湖北麦冬;,,,茎尖;,,,离体培养  摘要:目的探讨湖北麦冬种质改良的途径。方法利用茎尖分生组织离体培养技术再生植株。结果茎尖外植体愈伤组织诱导,不定芽分化与增殖的适宜培养基为MS+BA(1.0~2.0)mg/L+IBA(0.1~0.3)mg/L;生根适宜培养基为1/2MS+NAA0.1或IBA0.1~0.3或IAA0.3。结论初步试验湖北麦冬茎尖再生植株生产性状优于当地品种。  关键词:湖北麦冬;茎尖;离体培养  TheTechnologicalResear

2、choninvitroCulturefromStemTipofLiriopespicatavar.proliferaY.T.Ma  Abstract:ObjectiveToexploretheprovethegermplasmofLiriopespicatavar.proliferaY.T.Ma.MethodsMakeuseofstemtipmeristemtissueinvitroculturetechnologytoregenerateplant.ResultsThesuitableculturemediumofstepti

3、pexplantcaclustissuesabductianandindefinitepuddifferentiationandmutiplicationisMS+BA1.0~2.0+IBA0.1~0.3,thesuitableculturemediumofradicationis1/2MS+NAA0.1orIBA0.1~0.3orIAA0.3.ConclusionExperimentshotip;Invitroculture  湖北麦冬(Liriopespicatavar.proliferaY.T.Ma)属百合科山麦冬属植物,

4、为《中国药典》(1995年版)新增品种山麦冬的原植物。其块根与麦冬块根有相似的化学成分与药理活性〔1〕。湖北麦冬含多种甾皂苷。此外,还含有71%的单糖类和寡糖类,具有养阴生津、润肺补心、除烦安神等功效〔2〕。湖北襄樊市为湖北麦冬主产区,种植面积现已发展到3000ha,成为全国麦冬三大生产基地之一,但在其主栽区湖北襄樊市欧庙镇,湖北麦冬长期单一采用无性分株方式繁殖,导致湖北麦冬种质退化;品质与单产呈逐年下降趋势。为此,湖北省科技厅在2001年立项的科技攻关项目《湖北麦冬规范化种植与示范基地建设》中,将湖北麦冬种质改良列为重要的研究

5、内容之一。本试验利用茎尖离体培养技术成功地建立了湖北麦冬无性繁殖系,为进一步利用生物技术改良湖北麦冬种质奠定了一定基础,具重要现实意义。  1材料与方法  1.1材料于20010506,取湖北麦冬植株,去根、剥离叶片,只留包裹茎尖的嫩叶回实验室。材料取自湖北襄樊市欧庙镇湖北麦冬大田。  1.2方法  1.2.1茎尖表面灭菌将嫩叶包裹的茎尖用饱和洗涤液浸泡5~10min,用自来水冲洗5~10min,除去表面污物,然后在超净台上用70%酒精浸泡20~30s,无菌水冲洗1次,再用0.1%HgCl2浸泡6~7min,最后用无菌水冲洗4~

6、5次,1~2min/次,滤干水分以备接种。  1.2.2茎尖剥离在超净台上,将已表面灭菌的芽放在有无菌纸的培养皿中,在一台带光源的解剖镜下,一手用镊子将芽固定于视野中,一手用解剖针将幼叶与叶原基剥离,至出现裸露生长点,用锋利的长柄刀片将茎尖(0.2~0.3mm)切下,可带1~2叶原基或不带叶原基,然后及时用解剖针将切下的茎尖接种于分化培养基上。  1.2.3培养基及培养条件以MS为基本培养基,附加两种不同浓度水平的外源激素6-BA(0.1,0.5,1.0,2.0,3.0)和IBA(0.05,0.1,0.3,0.5),共20个不同

7、浓度水平的组合进行愈伤组织的诱导培养,并用上述双因子组合共4个处理进行不定芽诱导和增殖培养;以1/2MS(MS中矿质元素减半)为基本培养基,附加激素NAA(0.1,0.3,0.6)、(0.1,0.3,0.6)和IAA(0.1,0.3,0.6),并以1/2MS为对照,共10个处理进行不定根分化培养。以上培养基中均附加3%蔗糖、0.68%琼脂、pH值5.8~6.2.。培养条件:温度:(23±1)℃,光照1500-2000LX,光照时间:12~14h/d。  2结果与分析  2.1两种激素不同水平组合对茎尖外植体愈伤组织形成的影响茎尖

8、接种于上述愈伤分化培养基中,培养15~20d,部分培养基上的茎尖有明显膨大,30~35d形成愈伤组织块,初期为白色,后转为淡黄绿色,40~45d后出现少量绿色颗粒状物。试验表明:在不同激素水平组合的培养基中,愈伤组织启动、生长与分化具明显差异(见表1)。最早启动

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