博尔纳病病毒感染对少突胶质瘤细胞中il

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1、博尔纳病病毒感染对少突胶质瘤细胞中IL【摘要】目的探讨博尔纳病病毒（Bornadiseasevirus,BDV）感染对少突胶质瘤细胞(oligodendrocyte,OL)中白细胞介素1β（interleukin1β，IL-1β）蛋白表达的影响。方法首先将OL和BDV感染的OL煮沸裂解，分别提取蛋白混合液，测定蛋白的浓度后，将二者的蛋白混合液浓度均调至10g/L，分别取蛋白混合液及其经10000r/min离心5min后的上清，沉淀后分别进行斑点免疫印迹试验（dot-blothybridization），检测OL和BDV感

2、染的OL中IL-1β的存在；同时，对提取的OL和BDV感染的OL中的蛋白混合液进行2倍系列稀释后进行斑点免疫印迹试验，检测细胞中的IL-1β的表达量的变化。结果斑点免疫印迹试验表明，OL和BDV感染的OL中提取的蛋白混合液及收集的沉淀均出现杂交阳性信号，而蛋白混合液离心后的上清未出现杂交阳性信号。等量的OL和BDV感染的OL的蛋白混合液经2倍系列稀释后进行斑点免疫印迹试验,OL的蛋白混合液在≤32倍的稀释度范围内有杂交阳性信号，BDV感染的OL的蛋白混合液在≤8倍的稀释度范围内有杂交阳性信号。结论①IL-1β在OL和BD

3、V感染的OL中均存在,且存在于本实验获得的蛋白混合液和沉淀中。②BDV感染使OL中的IL-1β的表达量降低，提示IL-1β的表达量下降，有可能使其参与的脑内的免疫生理及病理反应发生变化，这可能是BDV感染致病的机制之一。【关键词】博尔纳病病毒；少突胶质瘤细胞；白细胞介素-1β；斑点免疫印迹试验　　Abstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectsofBornadiseasevirus(BDV)infectionontheexpressionofinterleukin1β(IL-1β)pro

4、tEinofoligodendrocytes(OL).MethodsBothOLandtheBDV-infectedOLixtureination,theproteinmixturesinfor5mintoextractproteinmixturesandsupernatant,inationofIL-1βinOLandBDV-infectedOL.MeanixturesextractedfromOLandBDV-infectedOLinethevariationsoftheexpressionlevelsofIL-1β

5、inthecells.ResultsDot-blothybridizationshoixturesandprecipitatesextractedfromOLandBDV-infectedOL,centrifugedproteinmixtures.EqualamountofproteinmixturesoftheOLandtheBDV-infectedOLixturesofOLixturesofBDV-infectedOLpositivehybridsignalsent,presentintheproteinmixtur

6、esandprecipitates.②BDVinfectionleadstothedecreasedexpressionofIL-1β,suggestingthatthedecreaseinthelevelofIL-1βexpressionmightbeinvolvedinthechangesofimmunological,physiologicalandpathologicalreactionsightbeoneofthepathogenicmechanismsofBDVinfection.　　KeyRNA发生下调，可

7、导致IL-1β的表达量下降，可能使得IL-1对神经系统的作用发生改变，使其参与的脑内的免疫生理及病理反应发生变化，而这可能也是BDV感染致病的机制之一［1］；通过本研究观察BDV感染对OL中IL-1β表达量的影响，进一步解释BDV感染致病的机制。　　1材料和方法　　1.1材料　　1.1.1细胞OL和BDV感染的OL均由天本大阪大学生田和良教授惠赠，HeLa细胞由哈尔滨医科大学微生物学教研室提供。　　1.1.2细胞培养试剂0.02%EDTA和含10%胎牛血清(FCS)、1×105U/L青霉素,100mg/L链霉素的DMEM

8、。　　1.1.3总蛋白提取试剂双蒸馏水和PBS洗液。　　1.1.4斑点免疫印迹试验试剂三氨基甲烷缓冲盐溶液，TBS洗液,3%的封闭液（3g脱脂奶粉溶于100ml的TBS）,一抗(兔抗人IgG)、二抗(羊抗兔IgG)及DAB显色试剂均为博士德公司产品。　　1.1.5主要仪器离心机(TGL-16G，上海安亭科学仪器厂)，