博尔纳病病毒感染对少突胶质瘤细胞中il-1β表达量的影响

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1、博尔纳病病毒感染对少突胶质瘤细胞中IL-1β表达量的影响【摘要】目的探讨博尔纳病病毒（Bornadiseasevirus,BDV）感染对少突胶质瘤细胞(oligodendrocyte,OL)中白细胞介素1β（interleukin1β，IL-1β）蛋白表达的影响。方法首先将OL和BDV感染的OL煮沸裂解，分别提取蛋白混合液，测定蛋白的浓度后，将二者的蛋白混合液浓度均调至10g/L，分别取蛋白混合液及其经10000r/min离心5min后的上清，沉淀后分别进行斑点免疫印迹试验（dot-blothybridization），检测OL和BDV感染

2、的OL中IL-1β的存在；同时，对提取的OL和BDV感染的OL中的蛋白混合液进行2倍系列稀释后进行斑点免疫印迹试验，检测细胞中的IL-1β的表达量的变化。结果斑点免疫印迹试验表明，OL和BDV感染的OL中提取的蛋白混合液及收集的沉淀均出现杂交阳性信号，而蛋白混合液离心后的上清未出现杂交阳性信号。等量的OL和BDV感染的OL的蛋白混合液经2倍系列稀释后进行斑点免疫印迹试验,OL的蛋白混合液在≤32倍的稀释度范围内有杂交阳性信号，BDV感染的OL的蛋白混合液在≤8倍的稀释度范围内有杂交阳性信号。结论①IL-1β在OL和BDV感染的OL中均存在,

3、且存在于本实验获得的蛋白混合液和沉淀中。②BDV感染使OL中的IL-1β的表达量降低，提示IL-1β的表达量下降，有可能使其参与的脑内的免疫生理及病理反应发生变化，这可能是BDV感染致病的机制之一。11【关键词】博尔纳病病毒；少突胶质瘤细胞；白细胞介素-1β；斑点免疫印迹试验　　Abstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectsofBornadiseasevirus(BDV)infectionontheexpressionofinterleukin1β(IL-1β)proteinofoligodendrocy

4、tes(OL).MethodsBothOLandtheBDV-infectedOLweresubjectedtoboilinglysis,andtheirproteinmixturewasrespectivelyextracted.Afterconcentrationdetermination,theproteinmixtureswereadjustedto10g/Landcentrifugedat10000r/minfor5mintoextractproteinmixturesandsupernatant,whichwereprecipi

5、tatedtohavedot-blothybridization,respectivelyfordeterminationofIL-1βinOLandBDV-infectedOL.Meanwhile,theproteinmixturesextractedfromOLandBDV-infectedOLweretestedbydot-blothybridizationafter1∶2serialdilutiontodeterminethevariationsoftheexpressionlevelsofIL-1βinthecells.Resul

6、tsDot-blothybridizationshowedthatpositivehybridsignalswerepresentinboththeproteinmixturesandprecipitatesextractedfromOLandBDV-infectedOL,whilenopositivehybridsignalsweredetectedinthesupernatantobtainedfromcentrifugedproteinmixtures.EqualamountofproteinmixturesoftheOLandthe

7、BDV-infectedOLweretested11bydot-blothybridizationafter1∶2serialdilution.PositivehybridsignalsweredetectableinproteinmixturesofOLwithintherange≤1∶32serialdilution,whileintheproteinmixturesofBDV-infectedOLpositivehybridsignalsweredetectablewithintherange≤1∶8.Conclusion①IL-1β

8、arepresentinbothOLandBDV-infectedOL,andinthisexperiment,presentintheproteinmixturesandpre