梅毒螺旋体抗体胶体金法测定

梅毒螺旋体抗体胶体金法测定

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1、鄂尔多斯市检验科免疫室作业指导书文件编号:EEDSZXY-3-MY-33版本/修订号:A/O生效日期:20090401主题内容梅毒螺旋体抗体胶体金法测定编制人:牛兵审核人:段宝生第125页共135页梅毒螺旋体抗体胶体金法测定1【目的】定性检测血清或血浆中是否含有梅毒抗体2【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动,可由任一使用本SOP的工作人员提出,并经下述人员批准:专业主管,科主任。3原理梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒(胶体金法)采用高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术来定性检测血清/血浆中是否含有梅毒抗体,试剂盒含有被事先固定于膜

2、上测试区(T)的重组特异性梅毒抗原和质控区(C)的相应抗体。测试时,血浆/血清标本滴入试剂盒加样孔(S)内,血标本中的梅毒抗体与预包被在膜上的胶体金结合物反应。然后,混合物随之在毛细效应下向上层析,在测试区(T)与固定在膜上的重组特异性梅毒抗原反应。如果血清中含有抗梅毒抗体,在测试区内(T)会出现一条紫红色条带,表明时阳性结果。如果在测试区内(T)没有出现紫红色条带,则血标本中不含有抗梅毒抗体,表明是阴性结果。无论抗梅毒抗体是否存在于血标本中,混合物都会继续向上层析至质控区(C),质控区的相应抗体与胶体金结合物反应出现一条紫红色条带

3、。质控区内(C)所显现的紫红色条带是判定层析过程是否正常的标准,同时也作为试剂的内控标准。4标本采集与处理:4.1受检者准备:4.1.1受检者的状态:a.不可变的生物因素:年龄,性别,生活环境遗传;b.可变的生物因素:A)情绪:原则上患者应在平静,休息的状态下以晨起空腹时采集标本,患者对采集标本时的恐惧、紧张会造成标本采集的失败。B)运动:受检者应处于平静状态下采集标本,可减少由于运动带来的影响。C)生理节律变化:昼夜的生理变化可能使测定结果不恒定,晨起固定时间空腹血尽可能减少昼夜节律带来的影响。4.2采取标本时:A)体位:除非是卧

4、床的病人,一般采血时取坐位。鄂尔多斯市检验科免疫室作业指导书文件编号:EEDSZXY-3-MY-33版本/修订号:A/O生效日期:20090401主题内容梅毒螺旋体抗体胶体金法测定编制人:牛兵审核人:段宝生第126页共135页B)止血带:一般从肘静脉采血使用止血带的时间不宜超过1min,穿刺成功后立即松开止血带,静脉阻滞也可影响。4.3受检者的饮食:餐后采集的标本,易发现乳糜状,影响检验测定的正确性,故应嘱受检者采晨起空腹血为宜。4.4药物的影响:目前文献尚无发现对其影响的报道,有待进一步完善。4.5输血及输液的影响:标本采集应避开

5、输血及输液侧。4.6标本的采集、保存、送检及处理。4.6.1标本的采集:A:种类:新鲜血清或血浆。B:时间:原则上以晨起空腹时采集标本。C:静脉采血:首选肘静脉,必要时采集其它静脉。D:采集方法:按照常规标本采集方法采集。E:容器要求:标本应采集至真空管(含或不含分离胶的普通生化管)管上应标有病人姓名、床号、科室、住院号或条形码唯一标识。F:标本采集量:一般常3ml全血,无需抗凝防腐,血清或血浆至少需600ul。4.6.2标本拒收标准:A:严重的溶血、脂血标本。B:血量不足。C:采集的标本离送检时间过长。D:用错采血容器。E:唯一性

6、标志错误或不清楚。F:输血、输液中采集的标本或同侧采血。G:其它4.6.3标本的处理方法:标本采集后应尽快送实验室,检验科核对标本后,双方登记签字确认,转送免疫室。免疫室人员进行编码后立即离心,按常规方法分离血清。4.6.4标本储存预知:血清储存于4℃-20℃,10天内稳定,室温放置,2d内稳定,如当日不能测定,推荐将血清保存于-20℃一周内完成测定。5试剂:本试剂购自北京宇辉佳诚科技发展有限公司。A:试剂盒组份:梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒(胶体金法)40人份一次性塑料吸管40人份缓冲液2瓶B:试剂盒应储存于4-30℃,阴凉避光干燥处

7、,有效期24个月。鄂尔多斯市检验科免疫室作业指导书文件编号:EEDSZXY-3-MY-33版本/修订号:A/O生效日期:20090401主题内容梅毒螺旋体抗体胶体金法测定编制人:牛兵审核人:段宝生第127页共135页6操作步骤:在进行测试前将试剂和标本恢复至室温(20-30℃)。6.1将试剂盒置于干净平坦的台面上,用塑料吸管吸取血清/血浆标本,垂直滴入1滴(约25ul)于加样孔S中,然后加入2滴缓冲液(约75ul)于加样孔S中。6.2等待紫红色条带的出现,在15分钟内读取测试结果。关键要注意,在紫红色条带出现以前,背景要清晰,特别当

8、样本中含有低滴度的抗梅毒抗体,会导致出现的T线颜色很淡,此时更需注意背景清晰。在30分钟后读取放入结果无效。7结果判断:阳性(+):两条紫红色条带出现。一条位于测试区内(T),另一条位于质控区内(C)内。阳性结果表明:标本中含有梅毒抗

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