苦瓜蛋白抑制肿瘤基质金属蛋白酶的活性及表达

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1、苦瓜蛋白抑制肿瘤基质金属蛋白酶的活性及表达作者：熊术道，尹丽慧，李景荣，叶爱芳，章圣辉，温博贵【摘要】　　［目的］探讨苦瓜蛋白对H22荷瘤小鼠基质金属蛋白酶表达及其活性的影响。［方法］将清洁级ICR雄性小鼠随机分成5组，建立肝癌H22移植瘤模型，分为阴性对照组、高剂量组(T3)、中剂量组(T2)、低剂量组(T1)及阳性对照组（CTX,环磷酰胺处理组）。在普通饲料饲喂的基础上采用腹腔注射给药法分别予阴性对照组生理盐水；高、中、低剂量组分别给以不同剂量苦瓜蛋白；阳性对照组予环磷酰胺。观察苦瓜蛋白对抑瘤率的影

2、响，明胶酶谱法检测荷瘤小鼠血清基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9的活性及其变化。［结果］苦瓜蛋白组低、中、高剂量组及阳性对照组抑瘤率分别为52.05%、66.89%、85.81％及65.10％；各苦瓜蛋白干预组与阴性对照组相比，MMP-2、MMP-9的活性降低，酶原表达下调(P<0.01)，上述作用与苦瓜蛋白剂量相关。［结论］苦瓜蛋白具有抑制基质金属蛋白酶表达及其活性的作用，其抗肿瘤作用可能与苦瓜蛋白具有抑制MMPs的活性及其表达有关。【关键词】苦瓜蛋白　移植性肿瘤　抗肿瘤作用　基质金属蛋白酶　

3、　Abstract:［Purpose］ToexploreeffectofMomordinonexpressionandactivityofmatrixmetalloproteaseinmurinetransplantedtumor(H22).［Methods］MalemiceofICRspecieslydividedinto5groupsandthenconstructedthetransplantationtumormodeloflivercancerH22.Thenegativecontrolgro

4、upalsaline;T1,T2andT3groupbyMomordiniddleandhighdoserespectivelyandpositivecontrolgroupbycytoxan(CTXgroup).Allthemiceinistration.TumorinhibitiverateofMomordineasured.ActivityofMMP-2andMMP-9inserumography.［Results］Tumorinhibitionrateinloiddleandhighdoseof

5、MomordinandCTXgroupordintreatedgroupsparedtothenegativecontrolgroup(P<0.01).TheabovefunctioncorrelatedtothedoseofMomordin.［Conclusion］Momordinplaysaroleofinhibitoryeffectontheexpressionandactivityofmatrixmetalloproteaseanditsanti-tumoractivitymaybeinv

6、olvedinregulatingtheexpressionandactivityofmatrixmetalloprotease.Keyordin;transplantedtumor;anti-tumoractivity;matrixmetalloprotease.苦瓜(momordicacharantia)属葫芦科植物，中医认为其具有消暑涤热、明目、解毒之功效。苦瓜蛋白(momordin)是从苦瓜籽中分离出来的一种分子量约为30kD的碱性糖蛋白质，属于Ⅰ型核糖体失活蛋白(ribosomeinhibit

7、ingprotEin，RIP)。近年来研究表明RIP具有明显的抗肿瘤、抗病毒作用，具有极高的药用价值[1，2]。本文在前人分离纯化RIP的工作基础上，采用强阳离子交换层析SPSepharoseHighPerformance为分离介质分离纯化得到了苦瓜籽蛋白，我们前期的研究表明苦瓜RIP可以明显诱导K562细胞产生细胞凋亡[3，4]。为进一步研究苦瓜RIP对动物移植性肿瘤的作用（invivo）的分子机制，我们研究了苦瓜蛋白对移植性肝癌H22荷瘤小鼠抑瘤作用及基质金属蛋白酶的抑制作用，以进一步阐明苦瓜蛋白抗

8、肿瘤作用的机制，为促进苦瓜蛋白应用于抗肿瘤治疗提供理论和实验基础。1材料与方法1.1材料主要仪器：Imagemaster凝胶成像系统（GEhealth），垂直电泳仪(Bio-Radmini-protEInⅢ)。主要试剂：丙稀酰胺、甲叉双丙稀酰胺、过硫酸铵及TEMED等电泳试剂购置于上海生工生物工程有限公司。实验动物与细胞株：清洁级ICR雄性小鼠，体重18g～22g，温州医学院实验动物中心提供。ICR小鼠H22腹水瘤细胞由浙江中医学院生命科学