不同生长期白术多糖的含量测定

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1、不同生长期白术多糖的含量测定【摘要】目的比较不同生长期白术多糖含量的动态变化，确定白术的最佳采收时期，为白术多糖的开发利用提供依据。方法用乙醇去杂和水回流提取白术多糖，于489nm波长处用苯酚-硫酸比色法测定其含量。结果不同生长期白术多糖变化较大，其中9月底到10月底时期白术多糖的含量最高。结论以白术多糖含量为指标，不同生长期白术的最佳采收期为9月底到10月底。【关键词】白术;不同生长期;多糖;含量测定白术(RhizomaAtractylodisMacrocephalae)为菊科(positae)植物白术AtractylodesmacrocephalaKoidz的干燥根茎

2、。白术为多年生草本,栽培历史悠久,主产中国浙江省东阳、磐安一带,是著名的道地中药材“浙八味”之一[1]，分布于浙江、江西、湖南、湖北、陕西，亦多栽培[2]。近几年以来,中国对白术的需求量大增,居全国大宗常用中药材之首。其含有白术多糖、挥发油、氨基酸等多种有效成分[3～6]，中药多糖具有增强机体免疫功能及抗肿瘤等药理作用[7～9],而且几乎没有毒性。但目前对白术多糖的含量测定报道还较少。因此可采用一种方法提取不同时期白术中多糖类成分，应用硫酸-苯酚比色法测定其含量[10,11]，分析并对其进行比较，考察出多糖类成分的含量特征，为确定最佳采收期、种植条件打下基础，也为白术多糖

3、的开发应用提供参考。　　1材料、仪器与试剂　　1.1材料样品采集于浙江林学院试验地百草园，从4月份采样至10月份，每半个月一次，有4月21日，5月5日，5月18日，6月3日，6月17日，7月7日，7月24日，8月6日，8月27日，9月10日，9月25日，10月12日，10月26日共13批样品，分别对其不同药用部位进行分离，标记分装，干燥，每批取样5份，洗净，减压干燥，粉碎，再分装干燥储存得到。　　1.2仪器UV-2501型紫外可见分光光度计(日本SHIMADZU)。　　1.3试剂乙醇，无水乙醇，苯酚，硫酸(均为分析纯);对照品葡萄糖(含量测定专用)。　　2方法与结果　　2

4、.1多糖的精制称取切片白术200g加6倍量70%乙醇→回流2次(每次2h)→抽滤→药渣加8倍量水→煎煮3次(每次1.5h)→合并水煎液浓缩至400ml→静置→上清液加乙醇调至70%静置→抽滤→沉淀加蒸馏水溶解，在上清液中加乙醇调至70%，静置→抽滤，沉淀用无水乙醇洗涤→60℃真空干燥，即得精制多糖。　　2.2样品溶液的配制准确称取0.2g白术药材粉末加70%乙醇50ml置锥形瓶中→冷浸2h→超声20min→抽滤→药渣挥干后加50ml蒸馏水，置烧瓶中→回流提取1h，滤液转移至100ml容量瓶定容，摇匀→精密移取10ml于100ml容量瓶定容，摇匀→即得供试品溶液。　　2.3

5、标准溶液的配制精密称取葡萄糖对照品10mg，加蒸馏水，定容至100ml容量瓶，摇匀→用移液管分别移取该溶液2，4，6，8，10ml，并分别加蒸馏水，定容至10ml，摇匀，即得不同浓度的对照品，标1，标2，标3，标4，标5→再分别移取1ml于试管中，加入5%苯酚1ml和硫酸5ml,摇匀，放置5min，于40℃水浴加热20min，测定吸光度。　　2.4检测波长的确定以水为空白，葡萄糖标准品溶液在390～590nm波长范围内测吸光度，在489nm处有最大吸收度。见图1。　　2.5方法学考察　　2.5.1苯酚-硫酸法标准曲线在489nm处测定各标准液的吸收度，得回归方程A=0.0

6、145C+0.0039,r=0.9985，表明葡萄糖对照品溶液在20～100μg/ml浓度范围内呈良好的线性关系。　　2.5.2稳定性实验取样品溶液在8h内每隔1h测定一次吸光度，在6h内稳定，RSD为1.31%。　　图1葡萄糖吸收光谱　　2.5.3重复性实验取白术平行样5份，结果显示RSD=2.91%，表明样品重复性好。　　2.5.4加样回收率实验在样品溶液中精密加入葡萄糖标准液(n=5)，并适当稀释，以样品液为空白，测定吸光度，计算回收率，平均回收率为100.24%，RSD为4.5%。　　2.6换算因子的测定精密称取粗制多糖100mg于容量瓶中，加蒸馏水溶解→定容，摇

7、匀→移取上述溶液5ml于100ml的容量瓶中，加蒸馏水→定容，摇匀。精密移取上述制备的溶液1ml于试管中，加苯酚和硫酸显色，重复3次，测定每次的吸光度，从回归方程中计算出多糖供试液中葡萄糖计的浓度。按下列公式计算：换算因子f=P-B的理化性质及降血糖活性的研究[J].药学学报，2003,38(6):438.　　[8]马庆华,张鹏霞,郭红艳，等.白术多糖对D-半乳糖致衰大鼠神经细胞抗氧化作用研究[J].中国老年学杂志，2006,26(12)：1658.　　[9]李冬青,王宏梅.白术多糖对激发态小鼠体液免疫的效应研究[J].现代中