对大孔树脂对葛根总黄酮的吸附及分离纯化的一点研究

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1、对大孔树脂对葛根总黄酮的吸附及分离纯化的一点研究摘要:以三峡库区丰富的葛根为材料,研究葛根黄酮的分离纯化工艺。方法利用柱层析技术,比较了4种大孔吸附树脂分离纯化葛根总黄酮的效果。结果用AB-8树脂柱进行吸附洗脱,洗脱液为60%乙醇,流速2.4ml/min,得到的葛根总黄酮(以葛根素计)纯度为53.5%,AB-8树脂的吸附容量为103.2mg/g。结论建立了AB-8大孔吸附树脂分离纯化葛根总黄酮的适宜条件,发现AB-8大孔吸附树脂在葛根总黄酮的分离纯化中有好的表现。关键词:葛根黄酮大孔吸附树脂分离纯化  Abstract:ObjectiveFla

2、vonoidsRadixPuerariseofYichang.MethodsFourexcellentmacroretiaclarresinsacroporousabsorptionresinandl/minelutingspeed.Thepurityoftotalflavonoidsg/g.ConclusionAfeasibletechnnologyatingthetotalflavonoidsinRadixpuerariae.  KeyberiliteXAD1-11﹑DiaionHp10-20;我国国内现以自行试制的大孔吸附树脂也有很多,包

3、括如天津南开大学化工厂生产的X-5,H107,S-8,NKA-9,AB-8,D3520,D4006树脂;上海医药工业研究所生产的SIP1300,SIP1400树脂;天津正天成澄清技术有限公司生产的ZTC(黄酮专用)树脂等等。  本文利用葛根70%乙醇回流得到的粗提液为原料,比较了AB-8、NKA-9,D3520,D4006等4种优良大孔吸附树脂分别在不同工艺条件下,分离纯化葛根总黄酮的效果。探讨了AB-8大孔吸附树脂分离纯化葛根总黄酮的工艺方法。1器材  1.1仪器UV-2201紫外分光光度计;自动柱层析分析系统:层析柱(φ15mm×500),

4、HL-2恒流泵,HD-A电脑采集器,HD-3紫外检测仪(上海泸西分析仪器厂)。  1.2材料  葛根:采自五峰土家族自治县。  葛根素标准品:购于中国药品生物制品检定所;AB-8,NKA-9,D3520,D4006大孔吸附树脂:购于天津南开大学化工厂;其它化学试剂均为分析纯。2方法[1~3]  2.1葛根粗提液制备采用70%乙醇,对葛根粉以1:10的固液比在85℃先后浸提两次,每次3h;合并滤液调pH8.5在旋转蒸发器上减压浓缩,以5000r/min在高速离心机上离心30min过滤,弃沉淀,得到葛根粗提液也即为吸附原液。  2.2葛根总黄酮含量

5、测定葛根总黄酮含量的测定采用以葛根素为对照品的紫外分光光度法。  2.2.1标准曲线的绘制精密称取干燥至恒重的葛根素25mg于50ml容量瓶中,以95%乙醇溶解,并稀释至刻度,摇匀,含葛根素0.5mg·ml-1,作为储备液。精密量取储备液0.00,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00ml,以95%乙醇稀至25.00ml,摇匀。分别于254nm波长处测定吸光度,制标准曲线图并计算回归方程。  2.2.2含量测定操作取干燥至恒重的干浸膏粉末(或洗脱液的干燥品)25mg放入50ml容量瓶中,加入25ml95%乙醇,置磁力加热搅拌器上温热溶

6、解,加乙醇稀释至刻度,摇匀。吸取1.00ml于25ml容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀。取1.0ml乙醇同样稀释作空白对照,在254nm波长处测定吸光度。换算出葛根总黄酮的含量。  2.3柱层析分离纯化  2.3.1大孔吸附树脂预处理95%的乙醇浸泡3~5d,待其充分溶胀后,用乙醇洗至流出液加适量水无白色浑浊现象,再用去离子水洗尽乙醇。  2.3.2树脂对葛根黄酮的吸附量与解吸率测定准确称取经预处理的树脂装入带塞磨口三角瓶中,精密加入葛根浸出原液置磁力加热搅拌器上,振荡24h,待充分吸附后,滤过,测定滤液中剩余黄酮浓度。计算各树脂室温下的吸附量和

7、吸附率。向吸附的饱和树脂中,精密加入95%乙醇,浸泡振荡24h,滤过,测定滤液黄酮浓度,根据黄酮解吸量计算解吸率。  2.3.3提取液吸附及洗脱根据待分离的提取液样品中总黄酮含量,选用合适量的处理好的大孔吸附树脂以湿法装柱,连接柱层析系统,加入样品,以去离子水洗脱糖等杂质,同时紫外检测器于280nm处检测。当糖等杂质被洗脱后,再以60%乙醇洗脱,洗脱液浓缩,检测总黄酮含量。3结果  3.1含量测定的回归方程建立以“2.2.1”方法绘制标准曲线,并建立浓度对吸光度的线性回归方程:A=67.1507C+0.06214;相关系数r=0.9958,相对

8、标准偏差RSD=0.52%,n=6。  3.2吸附量的测定以“2.3.2”方法对AB-8,NKA-9,D4006,D4520等4种大孔吸附树脂对葛根黄

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