卵圆细胞的生物学特征及其与肝癌发生的关系

《卵圆细胞的生物学特征及其与肝癌发生的关系》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、卵圆细胞的生物学特征及其与肝癌发生的关系【关键词】原发性肝癌卵圆细胞物学特征肝癌发生卵圆细胞最初是在1944年由opie等[1]在大鼠化学诱癌的过程中发现的。1956年，farber[2]首次将其命名为卵圆细胞。关于肝癌的发生，主要有两种不同的学说：一种认为肝癌是由分化成熟的肝细胞去分化而成，这是关于肝癌发生的比较经典的理论[3]；另一种学说认为肝癌是由肝内的干细胞——卵圆细胞异常分化所致；其代表人物sells等[4]根据卵圆细胞的形态、表型特征、癌基因表达等大量间接证据，认为肝细胞癌于卵圆细胞。由于卵圆细胞是一个异质性的细胞群，对其生物学特性还没有一个公认的结论，这样就导致分离、提纯卵圆细胞

2、还缺乏一个公认的标准。卵圆细胞的可能、卵圆细胞与肝癌发生之间的关系等依然是学术界争论的问题。正是基于以上存在的问题，我们设计了本实验，试图通过动态的方法观察卵圆细胞的生物学特征及其可能的，并为肝癌发生的干细胞异常分化学说提供一个实验依据。1材料与方法1.1动物模型的构建及标本处理选取的sd雄性大鼠和标准饲料由中山大学北校区实验动物中心提供，诱癌饲料由标准饲料加入0.06％3′甲基4二甲氨基偶氮苯（3′methyl4dimethylaminoazobenzene,3′medab）(东京化成工业株式会社)制成。.133229.29只sd大鼠分为2个实验组：诱癌组大鼠24只，喂饲诱癌

3、饲料和正常饮水；对照组大鼠5只则喂饲标准饲料和正常饮水。各组大鼠分别在诱癌后第4、8、14、17和24周处死（诱癌组第4周时处死4只，其后分4次各处死5只；对照组每次处死1只），取肝组织经4％甲醛固定，石蜡包埋并连续切片备用。1.2常规he染色和免疫组化(immunohistochemistry,ihc)he染色按照实验室常规方法进行。1.2.1免疫组化所选用的一抗、试剂盒及操作方法。ov6单抗，由美国steedab）因其诱癌效果好、癌变过程阶段性明显而成为使用最为广泛的诱癌剂之一[9]。ov6是美国休斯顿大学于1989年[10]制备的单克隆抗体，因其对卵圆细胞特异性强而作为一种示踪标志

4、。第14周以前，在诱癌剂的持续作用下，卵圆细胞的增生随着诱癌持续时间的延长而加重。但第14周以后，增生的卵圆细胞一部分向胆管细胞和肝细胞分化以修复受损的肝脏，另一部分却在诱癌剂作用下发生恶性转化，形成混合性肝癌。实验性肝癌模型很好的说明了从卵圆细胞开始增生，然后经过肝癌的癌前病变[6,7]到混合性肝癌发生的过程。ov－6阳性细胞在肝癌发生过程中的分布特征与he切片中观察到的卵圆细胞的演变特征相吻合，从一个新的角度说明了卵圆细胞与肝癌发生之间有密切的关系。本动物模型所诱导的胆管细胞癌，根据其he形态特点，判断为细胆管细胞癌，是一种发生于细胆管或赫令管的特殊类型的胆管细胞性肝癌[11]。由于肝脏在

5、持续的诱癌剂的作用下，从卵圆细胞增生到胆管细胞癌变的进展很快（在诱癌的第14周开始即有胆管细胞癌的形成，到第24周才有明确的肝细胞癌灶形成），癌细胞依然保留ov－6这种卵圆细胞的分子标记，这也很好的证明了胆管细胞癌起源于卵圆细胞。我们的动物模型中从第8周就出现卵圆细胞由汇管区开始沿着肝界板增生的现象，与赫令管的组织结构特点相吻合，证实卵圆细胞可能于赫令管上皮的增生，与大多数的文献报道一致[12]。正是因为这一点，所以卵圆细胞与胆管上皮细胞共表达ov6也不足为奇了。也由于卵圆细胞于赫令管上皮这一事实，在诱癌剂的持续作用下，被激活的赫令管上皮细胞容易发生基因突变，形成细胆管细胞癌。而于赫令管上皮

6、的干细胞要经过不同分化阶段的卵圆细胞，然后经小肝细胞再分化成肝细胞，分化的路线较长，所以发生肝细胞癌的时间要明显滞后一些[1,13]。肝癌发生机制的复杂性决定了我们的诱癌模型肝癌形态结构的复杂性。afp，即甲胎蛋白，是一种幼稚肝细胞的标记，卵圆细胞表达afp与文献报道一致[14]，说明卵圆细胞具有幼稚肝细胞的特性，具有向肝细胞分化的潜能。一般认为afp也是肝细胞癌的一种特异性很强而敏感性较低的标志物[15]，本模型混合性肝癌中肝细胞癌灶阳性表达，证实了其肝细胞源性；但胆管细胞癌灶也有afp的弱表达，这是由于从卵圆细胞增生到胆管细胞癌变的进展很快，癌细胞依然保留卵圆细胞的分子标记，所以即使是胆管

7、细胞癌，也可以表达较弱的afp。ckit又称cd117，是干细胞因子（stemcellfactor）的受体，是骨髓干细胞的标志之一[16]。卵圆细胞表达较弱的ckit，说明卵圆细胞与骨髓源干细胞之间有某种渊源联系[16]。在胎儿早期，肝脏曾经是一个造血器官；在胎儿后期，造血干细胞由肝脏向骨髓迁移的过程中，可能仍然有部分残留在肝脏，并可能是卵圆细胞的前体细胞，所以卵圆细胞与骨髓源干细胞具有相同的