pkcα反义核酸提高smmc7721细胞对化疗药物的敏

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1、PKCα反义核酸提高SMMC7721细胞对化疗药物的敏【】目的探讨蛋白激酶c（proteinkinasec）反义核酸（antisenseoligonucleotides，asodn）联合5fu、hcpt、as2o3三种化疗药物对肝癌smmc7721的体外高效抑制作用。方法以聚乙烯亚胺（polyethyleneimine，pei）作载体转染pkcαasodn，用mc7721细胞的增殖抑制作用，并分别计算抑制率和ic50。结果5fu、as2o3、hcpt与peiasodn物联合使用后，

2、其ic50分别降低到3.9μg/ml、2.67μmol/l、1.46μg/ml,化疗药物的敏感性分别提高到单用化疗药物的2.86、1.84和4.01倍。结论pei介导的pkcαasodn与化疗药物5fu、as2o3、hcpt联合使用,可提高肝癌细胞对化疗药物的敏感性,通过与化疗药物的相加或协同作用,减少化疗药物的用量。【关键词】蛋白激酶c我反义核酸们肝肿瘤化学治疗聚乙烯亚胺原发性肝癌是一种对化疗药物不敏感的恶性肿瘤[1]。有报道在肝细胞癌变过程中,细胞信号转导异常起到了关键的作用,其中pkc

3、α表达异常与肝癌的发生发展密切相关[2,3]。反义寡脱氧核苷酸可以通过转录后抑制来抑制肝癌细胞增殖、诱导凋亡，但是细胞摄取率低、易被核酸酶水解，且使用剂量过大，费用昂贵。.133229.阳离子聚合体pei作为asodn载体可以显著提高其转染效率[4]。临床常规抗肿瘤药物虽然抗肿瘤效果肯定，但是其毒副作用大，易产生耐药性，病人耐受差，同样难以起到令人满意的效果[５７]。因此，本实验研究旨在探讨用聚乙烯亚胺作为载体，pkcαasodn联合5fu、hcpt、as2o3等常规抗肿瘤药物作用于肝癌细胞

4、，增强常规化疗药物的抗肿瘤作用，降低用药剂量，从而提高病人的生存时间和生活质量，减轻病人的经济负担。１材料与方法1.1细胞培养人肝癌smmc7721细胞由中山大学生物化学教研室惠赠；用含10%新生牛血清，rpmi1640培养。1.2试剂cck8（cellcountkit8）试剂（日本同仁化学研究所）；新生牛血清（天津tbd广州展晨）；pkcαasodn（北京塞百盛基因技术有限公司）,全硫代修饰,page纯化,-20℃冻存,使用前用无酚红rpmi1640培养液溶解。pkcaantisen

5、se：5′gttctcgctggtgagtttca3′。1.3l,每孔100μl,接种于96孔板,设3复孔,培养4h,待贴壁达40%～50%后,加入药物。设空白对照组、单纯asodn组、单纯化疗药物组、asodn联合化疗药物组和peiasodn联合化疗药物组,各组pkcαasodn浓度均为0.25μg/ml;pei与pkc质量比为3∶4，见表1～3；培养48h后,每孔加入cck8试剂10μl,继续培养1h,多功能酶标仪(biorad)测定吸光度a450nm(激发波长450nm,参比波长

6、655nm),计算增殖抑制率及各组ic50；增殖抑制率＝[a（对照组）－a（实验组）]/a（对照组）×100%；各化疗药增敏倍数＝单纯用药组的ic50/联合用药组的ic50。1.4统计学方法所有数据均用±s表示，使用统计软件spss13.0。1.5金正均q值法[8]判断化疗药物与反义核酸联合使用的效果q=ea+b/(ea+ebea×eb),ea和eb分别为单用反义核酸和单用化疗药物的抑制率,ea+b为合并用药的抑制率。式中分子代表“实测合并效应”,分母是“期望合并效应”,q值是两者之比,q0.8

7、5为拮抗,0.85≤q1.15为相加,q≥1.15为协同。2结果2.15fu与peiasodn联合使用效果单用5fu的ic50为15.64μg/ml;5fu与asodn联合使用,表现为拮抗作用(q0.85),ic50为26.74μg/ml;5fu与peiasodn联合使用,表现为协同作用(q≥1.15),ic50为3.9μg/ml,增敏倍数为4.01,见表1、4。2.2as2o3与peiasodn联合使用效果单用as2o3的ic50为4.93μmol/l;as2o3与asodn联合使

8、用,表现为拮抗作用(q0.85),ic50为5.33μmol/l;as2o3与peiasodn联合使用,表现为相加作用(0.85≤q1.15),ic50为2.67μmol/l,增敏倍数为1.84，见表2、4。2.3hcpt与peiasodn联合使用效果单用hcpt的ic50为4.18μg/ml;hcpt与asodn联合使用,表现为相加作用(0.85≤q1.15),ic50为3.1μg/ml，增敏倍数为1.34;hcpt与peiasodn联合使用,表现为协同作用(q≥1.15)