百草枯及其与代森锰、鱼藤酮联合暴露对小鼠黑质纹状

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1、百草枯及其与代森锰、鱼藤酮联合暴露对小鼠黑质纹状【摘要】目的探讨百草枯(PQ)及PQ与代森锰(MB)、鱼藤酮(R)对小鼠的联合暴露与帕金森病(PD)病因的关系。方法将48只健康清洁级5周龄昆明种小鼠随机分为生理盐水组(Saline组)、助溶对照组(Z组)、PQ(5mg/kg)组、PQ(5mg/kg)+MB(15mg/kg)组、PQ(5mg/kg)+R(0.8mg/kg)组、PQ(5mg/kg)+MB(15mg/kg)+R(0.8mg/kg)组，每组8只。采用腹腔注射方式进行染毒，染毒剂量为10ml/kg，每周染毒2次，连续染毒6en，CPu)脑区中DA的含量。结果单独P

2、Q暴露的小鼠没有引起黑质纹状体(SNCPu)通路的病理性改变;而PQ与MB或R的联合暴露仅导致SNc区域的病理变化，没有引起CPu中DA含量和行为学上的改变;PQ、MB及R三者的联合暴露可引起SNCPu通路的改变(P<0.05)，但是没有导致小鼠产生临床上类PD症状。结论成年小鼠低剂量亚慢性的PQ暴露不会引起SNCPu通路的损伤，而和其他环境毒物共同作用下会对SNCPu的DA能系统产生一定的影响。【关键词】百草枯;帕金森症;多巴胺;黑质纹状体帕金森病(Parkinson′sdisease，PD)病因至今尚不清楚，普遍认为是基因风险因素、环境暴露和年龄三者

3、共同作用引起的一种神经系统退行性疾病〔1〕。环境因素与PD的发病可能存在着一定的联系，但究竟何种农药可致PD目前尚不能肯定，对它们进行筛选也是十分困难。百草枯(praquat，PQ)是一种曾广泛应用于农业生产、结构为二氢吡啶类的除草剂，对于PQ能否引起黑质纹状体(SNCPu)通路的损伤问题存在争议〔2，3〕。PQ与杀真菌剂代森锰(maneb，MB)和杀虫剂鱼藤酮(rotenone，R)在使用区域上存在广泛的重叠，而以往对PQ和MB联合暴露的动物试验结果并不十分一致〔4，5〕，而对于PQ与R的联合暴露则少有报道。本研究基于当前对PQ的争议以及PQ与其他几种神经毒素联合

4、作用对SNCPu系统的影响进行研究，探讨哪些农药与PD直接相关。　　1材料与方法　　1.1动物清洁级5a公司)，其余试剂均为国产分析纯。F4500型荧光分光光度仪(日本日立株式会社)，XB(1.5g/L)分别溶于生理盐水中，R(0.08g/L)溶解于二甲亚砜：10%聚乙二醇(1∶1)的混合溶剂，含R的暴露组于每周一、四下午3时0.8mg/kg腹腔注射R，Z组注射等量的助溶剂(二甲亚砜：10%聚乙二醇);所有暴露组每周二、五下午3时PQ5mg/kg和MB15mg/kg进行腹腔注射，染毒剂量为10ml/kg，Saline组和Z组注射等量的生理盐水，所有组别全部暴露6，高

5、60cm的直木杆，杆顶部有一橡胶球，木杆固定于木制底座上。将小鼠头向下放置，后爪抓住橡胶球，记录动物从开始向下爬到前爪着地所用的时间，如遇小鼠中途停顿或转身向上爬，则重新检测，每只在记录前训练3次，训练完毕后对其进行爬杆时间测定3次。　　1.2.4自主活动计数自制木箱，底部面积为64cm×64cm底部刻出8cm×8cm的格子。在安静、光线较暗的环境中检测。小鼠适应环境10min后计数5min内小鼠移动的格子数，反映小鼠的运动活性。　　1.2.5小鼠SNc区域HE染色用1%的戊巴比妥钠0.5ml麻醉动物后开胸，先用4℃生理盐水快速冲洗血迹，然后用4℃的4%的中性甲醛先快后

6、慢的灌流固定15min后断头取脑，分出中脑部分置于同样的固定液中3d，梯度乙醇脱水、二甲苯透明、浸蜡、包埋。做SNc区段连续冠状切片，片厚6，裱片晾干后行HE染色。根据HE染色圈出SNc范围，每只动物取8张SNc区域的切片在200倍光镜下进行统计，将SNc区有清晰细胞轮廓的神经元作为计数对象，测定整个SNc内细胞数，对各组的细胞进行定量分析。　　1.2.6CPu中DA含量检测〔6〕在末次染毒后的第3天，每组取4只小鼠进行DA检测，在冰盘上迅速将小鼠断头取脑，放入冷的生理盐水中，去除脑膜和血液，分离CPu，滤纸吸干水分，称重后置于含有1ml冰冷(4℃)酸化正丁醇的匀浆器中

7、，在冰盘上制成匀浆，转移置具塞刻度离心管中，并用酸化正丁醇补充至3ml，混匀，测定DA浓度。步骤：匀浆液漩涡振荡30s，离心5min(2000r/min)，分别取上清液2.5ml+正庚烷5ml+0.1mol盐酸1ml，混匀，漩涡振荡30s，离心5min(3000r/min)，取水相0.5ml+1/15mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.2)1.5ml+0.1mol/LEDTA溶液(pH7.0)+碘液0.2ml混匀、静置，准确反应3min，加碱性亚硫酸钠0.5ml混匀、静置，准确反应3min，加6mol/L醋酸0.4ml，沸水浴20min，冷却