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1、NF?κB和Stat3信号途径在胃癌组织和细胞系中的活化韩竞春，黄磊，张开立，陈晓燕，孔庆友，孙媛，吴茉莉，李宏【摘要】 目的研究NF?κB和Stat3信号通路在胃癌组织中的活化状态及其与胃癌发生、发展的关系。方法应用免疫组化、RT?PCR和GC803（人胃低分化黏液癌）和BGC823（人胃低分化癌）从北京肿瘤研究所购进。（2）抗体：鼠单克隆NF?κB抗体（MSC8008，CellScience，Sydney,Australia），兔多克隆Stat3抗体（SantaCruz，CA，USA）。
2、1.2方法（1）石蜡组织微阵列的制作：石蜡组织微阵列采用自制的阵列制作仪制作。（2）免疫组化染色：免疫组化试剂盒：HistostainTM?plusKitsSP?9003(山羊SPKit)、SP?9000（通用SPKit）购自北京中山生物技术有限公司；按照SP试剂盒说明进行免疫组化染色。结果的判定按文献[2]进行。（3）细胞培养：①MGC803和BGC823细胞培养液：DMEM培养基，10%胎牛血清。②AGS及HGC?27细胞培养液：Ham’sF?12培养液，10%胎牛血清，根据美国ATCC推荐[
3、3～4]。在细胞培养箱中培养细胞至80%汇合时收集细胞，提取RNA和蛋白用于实验分析。（4）RNA提取和RT?PCR分析：常规Trizol法提取总RNA。反转录体系依照TaKaRaRNALAPCRTMKit试剂盒提供说明书进行操作，PCR引物序列（TaKaRa生物工程有限公司）见 NF?κB（nuclearfactor?kappaB）是由Sen等于1986年首先在B细胞中发现的一种核蛋白[11]，它广泛存在于细胞中，是重要的转录调控因子，能与多种细胞基因的启动子和增强子序列位点发生特异性结合，从
4、而调节基因的转录和表达，主要参与细胞分化、免疫反应、炎症反应、细胞凋亡、肿瘤的发生发展等多种生物学功能。Stat3（signaltransducersandactivatortranscriptionfactor3）是近年来研究异常活跃的转录因子，多项研究结果显示Stat3在多种肿瘤组织与细胞系中异常表达和活化，并与肿瘤的增殖分化、细胞凋亡、血管新生和免疫逃避等密切相关。本研究结果显示，NF?κB和Stat3在胃癌组织中的表达率均较高，明显高于癌前病变组织，而且NF-κB和Stat3的活化与胃癌组
5、织学类型无关，表明其在胃癌组织中的高活化状态可能与胃癌的发生发展密切相关，可能是导致胃癌组织中相关基因表达的重要因素。 大量研究表明众多的信号转导途径并非独立存在、独立完成某种生物学功能，它们在不同的层次上存在着信号交流，因而构成了复杂而精细的信号网络系统[12～13]。我们的研究也发现，在胃癌的发生发展中存在着至少包括,BazzoliF.Gastriccancer:otesdifferentiationandinducesFas?independentapoptosisofhumanmedul
6、loblastomacells[J].NeurosciLett,2003,351(2):83-86. [3]ChoiJH,AhnMJ,ParkCK,etal.Phospho?Stat3expressionandcorrelationausingtissuemicroarray[J].APMIS,2006,114(9):619-625. [4]KandaN,SenoH,KondaY,etal.STAT3isconstitutivelyactivatedandsupportscellsurviva
7、linassociationuraS,HussainSP,etal.Regulationofcyclooxygenase?2expressionbytheournecrosisfactoralphainprostatecarcinomacells[J].BiochemJ,2002,367(pt3):791-799. [7]GibbsCP,KukekovVG,ReithJD,etal.Stem?likecellsinbonesaras:implicationsfortumorigenesis[J]
8、.Neoplasia,2005,7(11):967-976. [8]LiH,ChenXY,KongQY,etal.CytopathologicalevaluationsbinedRNAandproteinanalysesondefinedcellregionsusingsinglefrozentissueblock[J].CellRes,2002,12(2):117-121. [9]Blume?JensenP,HunterT.Oncogenickinasesignalling[
