NFκB和Stat3信号途径在胃癌组织和细胞系中的活化.doc

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1、NFκB和Stat3信号途径在胃癌组织和细胞系中的活化作者：韩竞春，黄磊，张开立，陈晓燕，孔庆友，孙媛，吴茉莉，李宏【摘要】　　目的研究NFκB和Stat3信号通路在胃癌组织中的活化状态及其与胃癌发生、发展的关系。方法应用免疫组化、RTPCR和Western蛋白印迹等方法，在胃癌组织和细胞系中检测NFκB和Stat3的活化状态。结果NFκB和Stat3在胃癌组织中的表达明显高于癌前病变组织（P<0.01）；并在胃癌细胞系中处于活化状态。结论NFκB和Stat3信号通路在胃癌组织中呈活化状态

2、，与胃癌发生、发展密切相关。【关键词】胃肿瘤NFκBStat3信号传导　　Abstract：ObjectiveToillustratetheactivationstatusofNFκB,Stat3signalingsandtheircorrelationswithgastriccarcinogenesis.MethodsImmunohistochemistry,RTPCRandwesternblottingwereadoptedtodetectNFκBandStat3signalingactivat

3、ionsinthegastriccancertissuesandcelllines.ResultsExpressionsofNFκBandStat3weresignificantlyhigherinthecancertissuescomparedwithpremalignanttissues(P<0.01).ConclusionConclusionNFκBandStat3signalingswereactivatedingastriccancertissuesandassociatedwithga

4、striccarcinogenesis.　　Keywords：gastricneoplasm;NFκB;Stat3;signaling　　胃癌是世界范围内发病率和死亡率较高的恶性肿瘤之一，其确切的发病机制还不十分清楚[1]，目前认为是多因素参与的多阶段、多步骤、涉及多种基因改变的共同作用结果。因此研究胃癌发生、发展的分子生物学机制对于预防乃至选择合理的治疗策略都有着重要的意义。本研究对胃癌组织中NFκB和Stat3信号通路的活化状态进行探讨。　　1材料与方法　　1.1材料（1）标本来源和细胞系来源：54

5、例胃癌及癌旁组织均选自大连医科大学辽宁省癌症基因组学重点实验室建立的人胃癌组织库。胃癌细胞系AGS和HGC27购于美国ATCC（AmericanTypeCellCulture）细胞库。MGC803（人胃低分化黏液癌）和BGC823（人胃低分化癌）从北京肿瘤研究所购进。（2）抗体：鼠单克隆NFκB抗体（MSC8008，CellScience，Sydney,Australia），兔多克隆Stat3抗体（SantaCruz，CA，USA）。4　　1.2方法（1）石蜡组织微阵列的制作：石蜡组织微阵列采用自制的阵

6、列制作仪制作。（2）免疫组化染色：免疫组化试剂盒：HistostainTMplusKitsSP9003(山羊SPKit)、SP9000（通用SPKit）购自北京中山生物技术有限公司；按照SP试剂盒说明进行免疫组化染色。结果的判定按文献[2]进行。（3）细胞培养：①MGC803和BGC823细胞培养液：DMEM培养基，10%胎牛血清。②AGS及HGC27细胞培养液：Ham’sF12培养液，10%胎牛血清，根据美国ATCC推荐[3～4]。在细胞培养箱中培养细胞至80%汇合时收集细胞，提取RNA和蛋白用

7、于实验分析。（4）RNA提取和RTPCR分析：常规Trizol法提取总RNA。反转录体系依照TaKaRaRNALAPCRTMKit试剂盒提供说明书进行操作，PCR引物序列（TaKaRa生物工程有限公司）见参考文献[5～7]。（5）胃癌细胞系总蛋白的提取及Western印迹分析：常规提取细胞总蛋白。Western印迹分析参照文献[8]方法进行。　　1.3统计学方法使用SPSS12.0版本统计软件，选用KruskalWallis检验方法。　　2结果　　2.1NFκB和Stat3在不同病变胃组织中的表达见表

8、1，图1。　　表1NFκB和Stat3在不同病变胃组织中的表达（略）　　与癌前病变组比较，①P<0.01　　图1NFκB和Stat3在不同病变胃组织中的免疫组织化学染色结果（略）　　2.1.1NFκB在慢性萎缩性胃炎和肠上皮化生中的阳性表达率均较低，分别为20%（3/15）和25.0%（2/8），两组间比较没有统计学差异(P>0.05)。NFκB在胃癌组织中表达率为74.2%（23/31），明