eb病毒相关胃癌组织中nf―κb和bcl―2蛋白表达探究

《eb病毒相关胃癌组织中nf―κb和bcl―2蛋白表达探究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、EB病毒相关胃癌组织中NF-kB和bcl—2蛋白表达探究【摘要】目的探讨NF-kB及bcl-2蛋白在EB病毒相关性胃癌(EBVaGC)与非EB病毒相关性胃癌(EBVnGC)中的表达及意义。方法应用原位杂交技术(ISH)检测84例胃癌组织中EB病毒小RNA(EBER)表达情况；应用免疫组织化学方法(S-P法)检测84例胃癌组织中NF-kB及bcl-2蛋白表达情况。结果(1)9例(10.7%)胃癌组织EBER原位杂交阳性，属于EBVaGC；75例(89.3%)胃癌组织EBER原位杂交阴性，属于EBVnGCo(2)9例EBVaGC中7例(77

2、.8%)NF—kB表达阳性,75例EBVnGC中28例(37.3%)NF-kB表达阳性,NF-kB的表达在EBVaGC及EBVnG间存在差异(P0.05)。结论EBVaGC中NF-kB蛋白的高表达，提示EB病毒可能通过影响细胞转录调控而参与了EBVaGC发生、发展的过程。【关键词】EB病毒相关性胃癌；非EB病毒相关性胃癌;NF-kB；bcl-2【中图分类号】R735.2【文献标识码】B【文章编号】1005-0019(2013)12-0015-01基金项目：广西壮族自治区卫生厅自筹经费科研课题(合同号：Z2011113)EB病毒(EBV)

3、属于DNA疱疹病毒，该病毒编码大于85个基因组，大部分人群都感染过EB病毒，而且EB病毒与很多淋巴源性及上皮源性肿瘤密切相关。有研究表明，约有10%的胃癌与EB病毒感染有关[1],故这类胃癌又被称为EB病毒相关性胃癌（EBVaGC）。NF-kB作为重要的转录调控因子,起着核心枢纽作用，它可以调控很多基因表达，而这些基因又与细胞增殖、分化、凋亡、免疫反应、转化有着密切的联系；bcl-2能抑制细胞凋亡，延长细胞生存期，进而引发肿瘤。胃癌的发生、发展是一个多步骤、多因素影响的过程，涉及的机制非常复杂，本文通过原位杂交方法检测胃癌中EBER表达

4、情况及免疫组化方法检测NF-kB和bcl-2的表达情况，探讨它们与胃癌临床病理特征的关系及意义。1材料与方法1.1一般资料选择广西中医药大学第一附属医院2008年1月〜2013年6月手术切除并经病理检测证实为胃癌的蜡块标本84例，所有病例术前均未进行放疗、化疗，病理类型均为腺癌。其中男性48例，女性36例；年龄32〜87岁,平均年龄56岁。1.2EBER原位杂交EBER原位杂交试剂购于PanPath公司。组织蜡块切成4uni粘附于防脱片上，常规脱蜡及水化，蛋白酶K消化。滴加适量杂交液，551下孵育1.5小时，转移至37*下孵育12小时，

5、PBS浸泡洗涤，滴加适量一抗，于379下孵育30分钟，拭去组织周围的液体，滴加适量二抗，于室温下孵育20分钟。拭去组织周围的液体，滴加适量HRP聚合物，室温下孵育30分钟，PBS浸泡洗涤后滴加适量DAB显色液，在室温下孵育约3-10分钟，同时在镜下观察显色程度。1.3免疫组织化学法NF-kB及bcl-2单克隆抗体均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。5um厚切片。常规脱蜡水化后，柠檬酸高压修复，3%H202阻断内源性过氧化物酶，其余步骤按试剂盒说明进行操作。用PBS替代一抗作为阴性对照，用已知阳性片作为阳性对照。1.4结果判读EBER原位

6、杂交结果判定：EBER阳性表达于细胞核，呈棕黄色。免疫组化采用Volm使用的半定量法[2]：NF-kB阳性表达部位为胞质和（或）胞核，bcl-2阳性表达部位为胞质和（或）胞膜。1.5统计学分析应用SPSS15.0软件进行统计学分析，P0.05）（详见表1）。图1胃癌中EBER的表达X200图2胃癌中NF-kB的表达X200图3胃癌中bcl-2的表达X200表1胃癌组织中NF-kB及bcl-2蛋白表达情况3讨论胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，在消化道的恶性肿瘤中居首位。主要分布在亚洲、拉丁美洲和中欧地区，我国胃癌发病率很高。胃癌的发生与发展是

7、一个复杂的过程，涉及基因异常表达、细胞传导异常及细胞凋亡抑制等机制。EB病毒是与人类关系最密切的病毒之一，而且它与很多恶性肿瘤关系密切，例如鼻咽癌、伯基特淋巴瘤等等。自1991年Shibata等[3]首次在胃癌细胞中发现EB病毒以来，EB病毒相关性胃癌逐渐成为研究热点，国外研究报道胃癌EBV感染检出率7.3%〜16.9%[4],而且不同地区胃癌中EB病毒感染率存在明显差异。本研究中84例胃癌标本，有9例胃癌EBER阳性，阳性率为10.7%,与文献报道相符。在实验中发现,胃癌里大部分癌细胞都有EBER表达，由此推测EB病毒感染可能在EBV

8、aGC形成早期发挥作用---感染了EB病毒的肿瘤细胞发生单克隆性增殖，最后促使癌变进一步发展并导致几乎所有癌细胞均有EBER表达，这提示EB病毒与胃癌发生有密切关系。正常时，位于胞浆内的NF-kB与NF-k