吡柔比星对hl

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1、吡柔比星对HL高吉照许伟薛天阳安琪【关键词】:吡柔比星;,.freelol.L（终浓度）的THP继续培养12h;用DNA梯状凝胶电泳法（DNAladderelectrophoresis）和流式细胞检测技术（floetry，FCM）分别检测HL-60细胞的凋亡率。第2部分也分为A、B2组，A组加PBS液继续培养3h.freelol.L（终浓度）的THP继续培养3h;用FCM检测NF-κBp65活化率。结果1、10、100μmol.L的THP诱导HL-60细胞的凋亡率分别为（31.78±4.31）%、（47.25±5.27）%、（56.49±1.59）%，组间及与对照组（6.46±1.45

2、）%比较差异有统计学意义（P0.05）;诱导的HL-60细胞NF-κBp65活化率分别为（16.21±1.20）%、（23.98±3.21）%、（32.44±2.89）%，组间及与对照组（8.44±2.20）%比较差异有统计学意义（P0.05）。DNA梯状凝胶电泳Ladder出现从多到少的顺序为:100μmol.LTHP、10μmol.LTHP、1μmol.LTHP、对照组。结论THP在促进HL-60细胞凋亡的同时有诱导其NF-κBp65活化的作用，均存在剂量依赖。关键词:吡柔比星;HL-60细胞;细胞凋亡;核因子-κBp65Abstract:ObjectiveToexplorethe

3、effectsofpirarubicin（THP）ontheapoptosisandtheactivityofnuclearfactorkappaBp65（NF-κBp65）ofHL-60cells.MethodsTheexperimentediaofgroupA，andTHP1，10and100μmol.LaddedinthemediaoftherespectiveBsubgroups.Theap-optosisofHL-60cellsinedbyDNAladderelectrophoresisandfloetry（FCM）.Inthesecondpart，Thecellsilart

4、othatinthefirstpart，exceptforthattheculturesinedbyFCM.ResultsTheratesofapoptosisofHL-60cellsinducedbyTHP1，10and100μmol.Letime，promotestheactivationofNF-κBp65ofHL-60cellsindose-dependentmanner.Keyg.L葡萄糖，青霉素、链霉素各200U.L）中传代培养，每3～4天传代1次。培养条件:5%CO2，饱和湿度，37℃。1.2.2第1部分―――HL-60细胞凋亡指数生长期HL-60细胞1×106.L，置于

5、96孔培养板内，每孔各1ml，分别培养2h后，分为2组。A组加PBS液0.1ml;B组又分为3组，各组分别加入终浓度为1、10、100μmol.L的THP各0.1ml，各组继续培养12h后待测细胞凋亡率。1.2.3第2部分―――HL-60细胞NF-κBp65活化指数生长期HL-60细胞1×106.L，置于96孔培养板内，每孔各1ml，分别培养2h后，分为2组。A组加PBS液0.1ml;B组又分为3组，各组分别加入终浓度为1、10、100μmol.L的THP各0.1ml，各组继续培养3h后待测NF-κBp65活化率。1.2.4DNA梯状凝胶电泳法检测细胞凋亡率分别取第1部分各组样本200

6、μl加入400μl细胞裂解液，按照DAN电泳试剂盒说明书提取DNA。每孔取样8μl，混以含溴酚蓝的样品缓冲液，同时用Pharm-cia100bp的Marker，加入1.8%琼脂糖灌注的凝胶加样孔中，电压85V，30min，）3种THP浓度诱导HL-60细胞凋亡率组间两两及与对照组比较差异有统计学意义（P0.05），组间方差齐性检验F=679.19。见表1。表1不同剂量THP诱导HL-60细胞的凋亡率的比较与A组比较:*P0.05;THP组两两比较:P均0.052.1.2DNA梯状凝胶电泳法Ladder出现从多到少的顺序为:100μmol.LTHP、10μmol.LTHP、1μmol.L

7、THP、对照组。见图1。3讨论3.1THP对HL-60细胞凋亡的影响凋亡又称程序性死亡，受多基因调控，多种细胞因子参与。凋亡细胞在细胞形态学、生化学上均发生了特征性的变化，包括DNA片段化（fragmentation）、染色质浓缩、包膜泡化（blebbing）、细胞皱缩、凋亡小体形成、细胞内Ca2+浓度快速持续升高、相关酶的变化（如内源性核酸内切酶和转谷氨酰胺酶等）、表面结构的变化等，最终导致细胞裂解，其与细胞坏死有本质区别。诱导白血病细胞凋亡