12、抗酸染色

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1、临床微生物学：涂片找抗酸杆菌（改良碱性复红法）第1版第0次修改第3页共3页玉溪市人民医院检验科微生物室临床微生物学检验SOP文件项目名称：涂片找抗酸杆菌（改良碱性复红法）编号：YX-CX-XJ-001日期：2004年10月日1方法:改良碱性复红法。2原理：结核菌、麻疯杆菌、耻垢菌等抗酸性菌，因其菌体表面有一层脂或脂质之皮膜不易着色，但一经着色后酸或乙醇的作用亦是不容易把它脱色。利用这特性并以增强的染色液予染色，然后再以酸及乙醇加以处理，使其脱色后再对比染色，此时抗酸性菌仍是固定着最初色素的颜色（红色）。3试剂3.1

2、妻纳石炭酸复红溶液碱性复红乙醇饱和溶液10ml5%石炭酸溶液90ml3.2脱色剂浓盐酸3ml95%乙醇97ml3.3复染液(吕弗勒美蓝液)美蓝乙醇饱和溶液30ml10%氢氧化钾0.1ml蒸馏水100ml4试剂贮存：棕色瓶室温存放。5质量控制：每批配制后测试，结核分枝杆菌应为阳性。6操作步骤6.1涂片经火焰固定,加石炭酸复红溶液,盖满整个痰膜，徐徐加热至有蒸汽出现,切不可沸腾。染5min(若染色奴卡菌需要加长时间),用清洁水从玻片一端轻缓冲洗,冲去染色液,沥去剩余的水。6.2加脱色剂,不时摇动玻片至无红色脱落为止,用

3、清洁水从玻片一端轻缓冲洗,冲去染色液,沥去剩余的水。临床微生物学：涂片找抗酸杆菌（改良碱性复红法）第1版第0次修改第3页共3页6.3加复染液,染0.5~lmin,用清洁水从玻片一端轻缓冲洗,冲去染色液,沥去剩余的水。6.4干后镜检。分枝杆菌呈红色,背景为蓝色。7结果判断找到细菌或略带弯曲的杆菌，单个或平行相聚排列，有的呈分枝状，有的菌体内常有2-5个着色较浓的颗粒，抗酸染色染成红色，即可判断找到抗酸杆菌。8报告方法8.1抗酸杆菌阴性:连续观察300个不同视野,未发现抗酸杆菌;8.2抗酸杆菌可疑:1一8条抗酸杆菌/3

4、00个视野;8.3抗酸杆菌阳性（1+）:3-9条抗酸杆菌/100个视野;8.4抗酸杆菌阳性(2+):1-9条抗酸杆菌/10个视野;8.5抗酸杆菌阳性（3+）:1-9条抗酸杆菌/每个视野;8.6抗酸杆菌阳性(4+):>=10条抗酸杆菌/每个视野。9临床意义用以鉴别细菌：奴卡菌及放线菌可呈弱抗酸性，结核杆菌及其它分枝杆菌呈阳性。10注意事项10.1痰液，应留取晨痰，要深痰来自肺部的痰。10.2脑脊液、尿液、胸水、腹水等应离心取沉渣涂片。10.3玻片必须无划痕。10.4镜检至少300个视野，不得少于5分钟。10.5脱色时

5、间需根据涂片薄厚而定，厚涂片可适当延长，以几乎无红色为度。11参考文献[1]中华人民共和国卫生部医政司编.全国临床检验操作规程第2版南京：东南大学出版社，1997.[2]李仲兴、郑家齐、李家宏主编.诊断细菌学.香港:黄河文化出版社,1992.临床微生物学：涂片找抗酸杆菌（改良碱性复红法）第1版第0次修改第3页共3页编写人签名复审人签名审批人签名执行日期姓名：编写日期：2004年8月姓名：交审日期：2004年9月姓名：审批日期：2004年10月