医学优秀论文《快速灌流固定豚鼠肺组织石蜡制片探讨》

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1、医学优秀论文《快速灌流固定豚鼠肺组织石蜡制片探讨》-->快速灌流固定豚鼠肺组织石蜡制片探讨[关键词]豚鼠;哮喘;快速灌流固定;石蜡制片在糖皮质激素快速有效地缓解哮喘症状的非基因组机制研究中，建立豚鼠哮喘模型十分重要。本实验采用肺动脉灌流方法对豚鼠的肺进行快速灌流固定，采用此法获得的标本比较接近肺的真实状况。色(图IA)。甲苯胺蓝染色光镜观察;肺内肥大细胞呈紫红色，核呈蓝色;颗粒形态清晰，主要位于肺外周、肺血管、支气管和勃膜分泌腺周围的结缔组织内(图IB)。1.材料和方法成年雄性豚鼠60只，由第二军医大学实验动物中心提供，体质量4509左右。25%鸟拉坦。.

2、4ml/l009腹腔麻醉豚鼠，代写硕士论文将其腹位固定于实验台上，糖皮质激素给药，1%卵蛋白激发255，迅速开胸暴露心脏，将输液针管剪一斜面插人肺动脉根部，利用自制小型灌流仪器(将2副60ml空针一固定于平板上，针头处接输液管，两输液管交汇处连接三通管)，在糖皮质激素给药4305时大量快速灌流0.9%生理盐水60ml，在糖皮质激素给药4705时再快速灌流10环中性甲醛固定液50ml，可保证在smin内将肺脏进人固定状态，再缓慢灌流10%中性甲醛液30min后取出肺脏并将肺边缘切开轻压排气，人10%中性甲醛液(置40C左右水浴锅内)固定。组织固定后自来水冲洗

3、1一Zh，然后由低至高梯度脱水依次为:75%乙醇(30一60min)，85%乙醇(30mln)，95%乙醇火3次(l一Zh/次)，无水乙醇3次(l一Zh/次)，二甲苯透明(20min/次)又3次、浸蜡只3次(前2次为30rnin，第3次为lh)。石蜡包埋，切片厚度为4拜mH一E染色及甲苯胺蓝染色，染色后二甲苯透明和中性树胶封固.2结果H一E染色光镜观察:细胞核呈蓝色，细胞质和基质呈红色(图IA)。甲苯胺蓝染色光镜观察;肺内肥大细胞呈紫红色，核呈蓝色;颗粒形态清晰，主要位于肺外周、肺血管、支气管和勃膜分泌腺周围的结缔组织内(图IB)。3讨论采用肺动脉灌流固

4、定的豚鼠肺组织切片制作，能有效地防止以前直接浸泡固定等方法引起的肺泡塌陷及断头法残血从气管吸入而引起肺淤血。且因肥大细胞染色的组织要求新鲜，快速固定可避免其颗粒因组织存放过久而被破坏。同时，快速灌流固定能最大程度保持组织的酶活性，为明确研究非基因组机制奠定了形态学基础。自制小型灌流仪器简便、易操作。术后一旦出现危象，及时气管插管或切开并行机械辅助通气是救治成功的关键。辅助呼吸方式多采用同步通气(SIMV)方式，潮气量不宜过大。根据患者表情、皮肤颜色、呼吸动度、呼吸次数、血氧饱和度及动脉血气分析结果来调节呼吸机参数。同时呼吸道管理也非常重要，及时吸痰，加强肺

5、部理疗，保持呼吸道通畅也是危象救治成功的重要环节。Bed-lack等叫等发现MG术后危象多于术后早期发生，认为术后可适当延长气管插管时间，避免反复气管插管。本组1例术后曾发生危象4次并反复气管插管，累计机械通气辅助呼吸时间达23d才完全康复，因此脱离呼吸机须严格把握标准。部分患者在危象发生后需要较长时间使用呼吸机，因而行气管切开是必需和适当的。本组有5例机械通气超过1周，均实施了气管切开术。但气管切开为开放性创口，除增加患者痛苦外，尚有增加呼吸道感染、气管压伤、切口出血、纵隔气肿和感染等并发症，有可能进一步加重患者的病情。因此掌握MG患者围手术期气管切开的

6、适应证和时机甚为必要。结合本组发生术后危象患者行气管切开的经验，我们认为以下情况可考虑行气管切开:(l)反复发生肌无力危象，经积极处理不见好转者;(2)对预测术后发生危象可能性较大的患者，术后可延长气管插管时间，但若超过5~7d仍需呼吸机辅助治疗;(3)肺部感染者。MG术后可依据病情发展变化逐渐合理调整药物剂量。感染(尤其肺部感染)常会诱发或加重危象，危象又常合并感染，两者互为因果。所以防治感染是防治危象的重要环节，应选用有效、足量但又不引起神经肌肉传导阻滞的抗生素防治感染。对于术后出现危象的患者我们提倡应用大剂量激素(甲泼尼龙，500一1ooomg/d)

7、冲击治疗，有条件者可应用血浆置换，均能迅速有效解除危象困。此外，还有一些其他因素也有可能会影响危象进程，如原有慢性肺部疾病、糖尿病、高血压、心脏病、高龄等，在临床救治过程中需综合考虑。[