人参、甘草诱导pbmc分泌细胞因子和sil

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1、人参、甘草诱导PBMC分泌细胞因子和SIL作者：张剑平，徐克沂，高燕菁，樊文梅，魏红山，徐道振，陆蕴茹【摘要】目的探讨人参、甘草体外诱导人外周血单个核细胞（PBMC）分泌细胞因子机制。方法我们选择生晒参、红参、甘草三种中药的提取液加入PBMC培养液中，孵育5d后，采用ELISA方法测定上清液中的细胞因子水平。结果生晒参、红参、甘草能诱导PBMC分泌细胞因子和SIL-2R，其中药组TNF-α、SIL-2R、IL-2、IFN-γ含量明显高于细胞对照组，特别是生晒参诱生PBMC高分泌IFN-γ尤为突出。结论生晒参、红参、甘草对体外诱导PBMC分泌TNF-α、IL-2、IFN-γ细胞

2、因子和SIL-2R。【关键词】生晒参红参甘草PBMC细胞因子Studiesontheroleofinducedcytokines，SIL-2byginsengandglycyrrhizainPBMC【Abstract】ObjectiveInordertoelucidatetheroleofginsengandglycyrrhizaincellularimmunityregulationandstudythemechanismofinducedcytokinesbytheChinesemedicinesinvitro.MethodsPBMCradixginseng，radixg

3、insengrubraandglycyrrhiza，andcytokineslevelsethodsofELISA.ResultsRadixginseng，radixginsengrubraandglycyrrhizacouldinducehighlevelsofcytokines.ThelevelsofTNF-α，SIL-2R，IL-2andIFN-γamongthegroupofChinesemedicinemunitysysteminvitroasimmunopotentiator.Radixginsengechanismofimmuneregulation.【Keye

4、公司。1.1.4淋巴细胞分离液中国医学科学院天津血液病研究所。1.1.5IMDM营养液美国GIBCO公司。1.1.6IL-2（白细胞介素Ⅱ）检测试剂盒美国Biosos公司。1.1.7IFN-γ（干扰素-γ）检测试剂盒美国Biosos公司。1.1.8SIL-2R检测试剂盒白求恩医科大学免疫教研室。1.2方法1.2.1中药制备取生晒参、红参、甘草标准品各5g，分别加入双蒸水50ml，浸泡24h，加热回流2h，用中性滤纸过滤，置4℃冰箱沉降24h。4℃14000rpm离心10min，弃沉淀物，将上清液除菌，分装，4℃保存备用。1.2.2分离PBMC取肝素抗凝血50ml，用无Ca2+

5、，Mg2+，Hank’s液将抗凝血1：1稀释后，缓慢加在淋巴细胞分离液上，抗凝血与无Ca2+，Mg2+，Hank’s液和淋巴细胞分离液的比例为1：1：1，1700rpm离心20min，吸取淋巴细胞层，加入无Ca2+、Mg2+，Hank’s液混匀洗涤，1300rpm离心10min，弃上清，重复洗涤2次。进行细胞计数后，备用。1.2.3细胞因子诱生以细胞浓度2.5×106/孔置入24孔细胞培养板，实验组分别加入用IMDM营养液按一定比例稀释的生晒参、红参和甘草无菌溶液，对照组分别加入等量IMDM营养液，37℃、5%CO2孵育5d，分别取出培养上清，2000rpm离心10min，弃

6、沉淀物，待检测。1.2.4细胞因子测定严格按说明书操作测定细胞培养上清中细胞因子水平和SIL-2R。1.2.5统计学方法应用t检验。2结果生晒参、红参及甘草在没有任何诱生剂参与的情况下，体外诱导PBMC产生细胞因子，结果显示对照组的TNF-α、SIL-2R、IL-2、IFN-γ效价明显比实验组低，而生晒参诱导的PBMC上清液中IFN-γ水平又明显高于红参组，P图13讨论研究表明人参是一种正向免疫调节剂［2］。近年来国内外对人参、甘草的研究主要集中在药源开发、提取新的有效成分及药理药效方面的研究。研究中发现人参不仅可协同PHA对PBMC促诱生IFN-γ，而且还可增进IFN-γ基

7、因表达，促使IFN-γmRNA转录量增加及高分泌IFN-γ［3，4］。以往对人参、甘草的免疫药理学研究多侧重于体内观察及动物实验，尚未见到在体外实验中直接作用于PBMC并诱导分泌TNF-α、SIL-2R、IL-2、IFN-α的研究报道。淋巴细胞是机体免疫应答的核心，而淋巴细胞分泌的TNF-α、SIL-2R、IL-2、IFN-α等多种细胞因子，又是T淋巴细胞的活化指标。IL-2是一种由TH细胞分泌的具有显著调节免疫应答作用的介质，能活化巨噬细胞，增强NK细胞和LAK细胞活性，诱生IFN，及激活B细胞产生抗