人参总皂苷和小檗碱对肺癌pg细胞分泌免疫抑制性细胞因子的影响论文

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1、人参总皂苷和小檗碱对肺癌PG细胞分泌免疫抑制性细胞因子的影响论文郝钰,王萍,吴珺,邱全瑛【摘要】目的：观察人参总皂苷（ginsenoside,Gs）和小檗碱（berberine,Ber）对肿瘤细胞分泌免疫抑制性细胞因子转化生长因子β1（transforminggrol）组、Ber（10μg/ml）组、空白对照组和Jurkat组。用Gs和Ber作用PG细胞24h后与Jurkat细胞共培养，24h后倒置显微镜下观察Jurkat细胞生长的状态；台盼蓝拒染实验计数共培养6h和24h后Jurkat活细胞数；流式细胞仪检测共培养24

2、h后Jurkat细胞的凋亡率；100、50、25μg/ml的Gs和10、5、2.5μg/ml的Ber分别处理PG细胞，并设空白对照组（PG细胞未经药物处理），酶联免疫吸附测定法和放射免疫法检测PG细胞上清液TGFβ1和PGE2的含量。结果：Jurkat细胞与Gs和Ber处理过的PG细胞共培养后.freeledicine,ontransforminggroofhumanlungcarcinomacelllinePGandhumanTlymphocytecelllineJurkatl)andBer(10μg/ml)fort

3、icroscope.TheviablecountofJurkatcellsetry.PGcellslGsand10,5,2.5μg/mlBerrespectively,andthecontentofTGFβ1andPGE2inPGcellselinkedimmunosorbentassay(ELISA)andradioimmunoassay(RIA)method.Results:AftercocultureberofJurkatcellsotethesecretionofTGFβ1inPGcells,butcoul

4、dnotchangethelevelofPGE2.Conclusion:GsandBercanpromotethegroayberelatedtotheupregulationofGsandBeronTGFβ1secretioninPGcells.Keymunologic;transforminggroajorhistopabilityplex,MHC）I类分子的缺乏、共刺激分子B7的缺陷、Fas分子下调耐受凋亡以及“Fas反击”和分泌免疫抑制性细胞因子等，使肿瘤不能有效地被免疫细胞识别和攻击，甚至主动下调宿主免疫功

5、能，从而逃避抗肿瘤免疫反应。我们的前期研究结果表明，Jurkat细胞与PG细胞共培养后数目减少，人参总皂苷（ginsenoside,Gs）和小檗碱（berberine,Ber）可以促进PG细胞的这种作用，该结果可能与Gs和Ber增加PG细胞的FasL表达，促进PG细胞诱导Jurkat细胞凋亡的“Fas反击”作用有关。但Jurkat细胞与PG细胞共培养后数目减少的原因除与“Fas反击”诱导的凋亡有关外，也有可能与PG细胞分泌某些免疫抑制性细胞因子相关。本研究检测了PG细胞分泌转化生长因子β1（transforminggro

6、l，Ber10μg/ml。Gs、Ber分别处理PG细胞24h，PBS缓冲液洗涤3次以洗去药液，消化离心后调整细胞浓度至2×105/ml，接种于25cm2培养瓶，同时设立未经药物处理的对照组（空白对照组）。待细胞贴壁后（融合至80％左右），各组弃去培养液，各加入浓度为3×105/ml的Jurkat细胞悬液10ml铺于PG细胞之上进行共培养。实验共培养组分为3组：Gs组、Ber组和空白对照组，同时设立Jurkat细胞单独培养组（Jurkat组）。以上4组每组设3个样本。100、50、25μg/ml的Gs和10、5、2.5μg

7、/ml的Ber分别处理PG细胞24h，弃去药液，冷PBS洗涤，离心重悬后各组用新鲜培养液调整至相同浓度，加入96孔培养板继续培养24h（同时设立不用药PG细胞组），共7组，每组4个复孔。1.4样本采集Jurkat细胞与PG细胞共培养6h和24h后，小心振荡培养瓶，使黏附的Jurkat细胞尽量脱落，移出细胞悬液于离心管内；各共培养瓶内加入胰酶消化液（无乙二胺四乙酸），使黏附的Jurkat细胞进一步脱落，镜下观察，至Jurkat细胞基本脱落而PG细胞未脱离时为宜，移入先前移出的Jurkat细胞悬液离心管内，离心弃上清，收集细

8、胞，供台盼蓝拒染实验和凋亡检测用。收集不同浓度Gs和Ber分别处理过的PG细胞上清液，供TGFβ1和PGE2检测用。1.5Jurkat细胞的生长状态观察共培养24h后，倒置显微镜下观察各组Jurkat细胞的生长情况。1.6台盼蓝拒染实验检测Jurkat活细胞数将共培养6h和24h后收集的Jurkat细胞调整至相同体