芪丹通脉片对大鼠海马局部缺血及hsp70蛋白表达的影响

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1、芪丹通脉片对大鼠海马局部缺血及HSP70蛋白表达的影响作者:王冰,王宗仁,王洪典,江山,李锋,马静,行利【关键词】芪丹EffectofQDTMTonexpressionofHSP70inhippocampusofratsia【Abstract】AIM:TostudytheeffectofQidantongmaiTablet(QDTMT)onratspalinfarction.METHODS:SeventytaleSDratslydividedinto6groups(n=12):control,shamoperated,ische

2、mia,QDTMTofhighdosage(QDTMTH),QDTMTofmoderatedosage(QDTMTM)andQDTMTofloodelsicalmethodsandtheexpressionofHSP70easuredbyimmunohistochemistryafterthepathologicalanalysis.RESULTS:ThepathologicalchangesdecreasedinratstreatedbyQDTMTparedorethanthoseincontrolgroup:ischemia

3、group(23±3),QDTMTH(89±8),QDTMTM(78±6),QDTMTL(46±6)(P<0.01).CONCLUSION:TheneuroprotectiveeffectofQDTMTmayberelatedia.【KeyaiTablet;braininfarction;hippocampus【摘要】目的:探讨芪丹通脉片(QDTMT)对大鼠海马局部梗死的影响和机制.方法:雄性SD大鼠72只,随机分为6组(n=12),即空白对照组、假手术组、缺血组、QDTMT高剂量组(QDTMTH),QDTMT中剂量组(Q

4、DTMTM),QDTMT低剂量组(QDTMTL).采用光化学法诱导大鼠单侧海马梗死模型,对缺血脑组织进行病理形态学分析及HSP70免疫组化.结果:QDTMT各给药组缺血灶内HSP70表达明显高于缺血组:缺血组23±3,QDTMTH组89±8,QDTMTM组78±6,QDTMTL组46±6(P<0.05).结论:QDTMT能减轻大鼠海马局部脑梗死损伤程度,可能与上调HSP70表达有关.【关键词】芪丹通脉片;脑梗塞;海马0引言脑缺血后HSP70在鼠脑中的表达具有神经保护作用,药物的干预等因素能影响HSP70在缺血性脑损伤细胞中

5、的表达.我们通过光化学法诱导的海马局部梗死模型,观察芪丹通脉片对缺血大鼠脑组织病理形态学及HSP70表达的影响,并对其脑保护机制进行了探讨.1材料和方法1.1材料SD雄性大鼠72只,体质量(200±20)g(第四军医大学实验动物研究中心提供).芪丹通脉片(QidantongmaiTablet,QDTMT)提取浸膏干粉(西京医院提供),加生理盐水配制成混悬液.虎红(四氯四碘荧光素钠粉剂,RB,北京化工厂,批号:810627),密封避光保存,使用前用生理盐水稀释为25g/L.自制冷光源(西京医院理疗科和西安飞秒光电集团联合研制),光

6、源为一充气氙灯,输出功率:MIN0.008AX0.37组(1.08mg/kg),QDTMTL组(0.36mg/kg).大鼠用10g/L戊巴比妥钠30mg/kg腹腔注射麻醉后,将其俯卧于脑立体定位仪上,沿头颅正中切开头皮暴露颅骨,在前囟后4.8mm、中线向左旁开3.6mm处,用牙科钻轻轻钻一个直径约1mm的骨窗,光纤管尾端至皮层下3.1mm(海马区).于尾静脉注射25g/L虎红(70mg/kg)后,立即通过光纤管照射30min.光照强度:0.372.术后缝合头皮,正常喂养.假手术组尾静脉注射等体积生理盐水后光纤插入照射.QDTMT

7、各剂量组于术后当日以10mL/kg灌胃QDTMT溶液1L迅速冲洗血液,再用40g/L多聚甲醛400mL灌注固定2h,取脑在4℃下进行后固定.1.2.3观察病理改变每组取6只鼠脑,梯度乙醇脱水,石蜡包埋,经缺血处连续切片,片厚5μm,每隔50μm取1片,HE染色,光镜下观察组织病理学改变.每只鼠脑取经缺血灶中心5张切片,光镜下(10×10)计数每张切片缺血灶内缺血神经细胞数.经海马部位取材3mm3大小组织块,30mL/L戊二醛前固定,10g/L锇酸后固定,0.1mol/LPBS漂洗、丙酮梯度脱水,丙酮∶包埋剂(1∶1)浸透,环氧树

8、脂包埋及修块,超薄切片后,JEM1200EX透射电镜下观察.1.2.4免疫组化分析每组取6只鼠脑,200g/L蔗糖脱水至沉底,冰冻切片机经梗死部位进行30μm厚连续冠状切片.取缺血灶相同层面脑片做HSP70免疫组化ABC法染色.主要步骤如下:切片经0.01mol

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