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1、肿瘤患者外周血中抑制性受体LAIR：薛江楠,王春艳,张晓姝,曹奇志,宿振国【摘要】 目的:研究LAIR-1在肿瘤患者中的表达,探讨其在抗肿瘤免疫应答中的作用。方法:应用夹心ELISA检测肿瘤患者血清中可溶型sLAIR-1的水平；应用免疫荧光染色和流式细胞术分析,观察LAIR-1在患者PBMC中NK细胞、CD4＋T细胞、CD8＋T细胞和B细胞上的表达。结果:肿瘤患者血清sLAIR-1水平为（4.6±3.2）μg/L,明显高于正常人血清sLAIR-1水平（3.9±3.0）μg/L,P<0.05。NK细胞,CD4+T细胞及CD8+T细胞
2、表达LAIR-1水平上调。肺癌患者CD4/CD8比值明显低于正常人,B细胞百分率明显高于正常人。NK细胞、CD4+T细胞CD8+T细胞中LAIR-1的表达阳性率高于对照组。结论:在肿瘤患者LAIR-1分子表达水平高于正常人。肿瘤患者抑制性受体LAIR-1表达水平的上调可能与肿瘤的免疫逃逸有关。【关键词】LAIR-1CD305抑制性受体肿瘤 近年来免疫抑制性受体的研究进展迅速,它们在肿瘤免疫应答中的作用日益受到重视。白细胞相关免疫球蛋白样受体1(leukocyte-associatedimmunoglobulin-likereceptor
3、-1,LAIR-1)为一种免疫抑制性受体,表达于包括T细胞和NK等在内的多种免疫细胞上,并抑制这些细胞的功能［1］,2004年在第8届国际人白细胞分化抗原专题讨论会上获CD305编号［2］。目前国内外还缺乏LAIR-1与肿瘤疾病相关性的研究报道。鉴于T细胞和NK细胞等在人体抗肿瘤免疫应答中发挥重要作用［3］,而LAIR-1能够广泛抑制上述免疫细胞的功能,我们采用夹心ELISA法和流式细胞术分别对肿瘤患者血清可溶型LAIR-1（sLAIR-1）水平和外周血淋巴细胞上LAIR-1分子的表达进行了检测,并对LAIR-1与肿瘤免疫的相关性进行了探
4、讨,为进一步了解肿瘤细胞与免疫系统的相互关系提供新的线索,并为肿瘤疾病的免疫治疗提供依据。 1材料和方法 1.1材料FITC标记的单克隆抗体(mAb)FMU-LAIR1.1和sLAIR-1夹心ELISA检测试剂盒由第四军医大学免疫学教研室制备［4］。RPMI1640培养基为美国Gibco公司产品,小牛血清(FCS)购自杭州四季青生物材料公司。PE、FITC或PE/Cy5标记的小鼠抗人CD3、CD4、CD8、CD19、CD56和同型对照mAb购自晶美公司。肿瘤患者33例,男20例,女13例,经活检病理诊断确诊,年龄17～50（平均45.
5、6）岁。30例正常人为健康体检者,男13例,女17例,年龄17～19（平均18）岁。血清由滨州医学院附属医院检验科及第四军医大学西京医院协助收集。 1.2方法 1.2.1血清标本采集患者血清于治疗及手术前采集,室温下静置30min后,2000r/min离心10min,取血清,置-20℃冰箱保存。 1.2.2sLAIR-1的检测夹心法ELISA检测sLAIR-1检测方法由第四军医大学免疫学教研室建立,按常规方法检测［4］。 1.2.3流式细胞术分析无菌抽取正常人和肿瘤患者外周血,肝素抗凝,Ficoll密度梯度法分离PBMC,100m
6、L/LFCSRPMI1640培养基重悬。用PE、FITC或PE/Cy5标记的小鼠抗人CD3、CD4、CD8、CD19和CD56mAb进行膜表面荧光标记,流式细胞术检测。 1.2.4统计学处理采用SPSS10.0软件进行数据分析,数据以x±s表示,计量资料均数比较采用方差分析。 2结果 2.1sLAIR-1在肿瘤患者和健康人血清中的水平共检测33例肿瘤疾病患者和30例健康人血清中sLAIR-1的水平。肿瘤患者血清sLAIR-1的水平为(4.6±3.2)μg/L,明显高于正常人血清sLAIR-1水平(3.9±3.0)μg/L,P<
7、0.05）。 图1正常人与肿瘤患者血清LAIR-1水平的比较（略） Fig1parisonsofserumsLAIR-1levelsbetor 2.2LAIR-1在肿瘤患者和健康人外周血NK细胞、CD4＋T细胞、CD8＋T细胞和B细胞上的表达检测了5例癌症患者和5例健康人外周血NK细胞、CD4＋T细胞、CD8＋T细胞和B细胞上的表达。其中肺癌患者3例,胆管癌和胃癌各1例。发现2例肺癌患者中CD4和CD8阳性细胞的百分率分别17.5%和45.8%,CD4/CD8为比值明显低于正常人,但CD4+T细胞和CD8+T细胞中LAIR-1表达百
8、分率均也有所升高。同时在B细胞和NK细胞中也观察到LAIR-1明显升高的现象。 细胞免疫在机体的抗肿瘤免疫中发挥重要作用。参与抗肿瘤免疫的细胞包括NK细胞、NKT细胞、γδT细胞、T细胞、巨
