肿瘤坏死因子琢在超重者脂肪组织中的表达

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1、肿瘤坏死因子琢在超重者脂肪组织中的表达何衡杰郝丽安徽医科大学第二附属医院肾内科，安徽合肥230601[摘要]目的探讨安徽汉族超重者与正常体重者脂肪组织中TNF-α基因的差异表达,分析TNF-α基因的表达与年龄（AGE）、体重指数(BMI)、腰围尺寸(I在18.5～24kg/m2之间）和19例超重者(BMI在24～28kg/m2之间)中的不同表达水平，并通过测量实验者的一系列指标，有体重、身高、臀围、腰围等，在此基础上计算出腰臀比例和体重指数，分析比较这些参数与TNF-α基因表达的相关性。结果腹部皮下与网膜脂肪组织中的TNF-α基因表达水平在

2、超重组与正常体重组间差异均无显著性；超重组组内与正常体重组组内的皮下及网膜脂肪的TNF-α基因表达差异亦无显著性；I:18.5~24kg/m2)and19over-2).Anthropometricdata,suchasheight,bodyference,hipcircumference;andassindex(BMI).Insulinresistanceindexetersentaladiposetissuesfromeachsubject.I在18.5～24kg/m2之间,年龄为33~70岁，平均年龄为51.2岁；二组年龄及性别基本匹

3、配。1．2方法1．2．1手术时取腹部皮下、网膜脂肪组织，取样后用液氮迅速冷冻并低温保存。按QIAGEN公司提供RNeasyMiniKit试剂盒说明书要求提取脂肪组织总RNA。紫外分光光度仪测定及琼脂糖电泳判断RNA质量。根据基因特异性cDNA序列，通过软件primer5.0设计特异性扩增引物，扩增TNF-α基因的特异性引物，上游序列为：5ˊ-GTGACAAGCCTGTAGCCCAT-3ˊ，下游序列为：5ˊ-TAGATGGGCTCATACCAGGG-3ˊ，扩增片段长度331bp；扩增β-actin基因的引物，上游序列为：5ˊ-GCTATCCA

4、GGCTGTGCTATC-3ˊ，下游序列为：5ˊ-CAGCACTGTGTTGGCGTACA-3ˊ，扩增片段长度495bp。RT-PCR：总RNA2uL，5倍逆转录反应缓冲液4uL,Oligo(dT)182.5uL,RNA酶抑制剂0.5uL,逆转录酶AMV2uL,dNTP8uL,加DEPC处理水至20uL,28℃放置10min，42℃温育2h，99℃5min灭活逆转录酶。PCR反应体系中包括：模板10uL，10倍PCR反应缓冲液5uL，4种混合单核苷酸4uL，肿瘤坏死因子上下游引物及β-actin上下游引物各1.0uL,Taq酶0.7uL,加

5、DEPC处理水至反应总体积50uL。第一步：94℃预变性1min；第二步：30个循环即94℃变性32s，59.9℃退火40s，72℃延伸1min；第三步：72℃再延伸4min[1]。1.2%的琼脂糖凝胶电泳反应产物，通过凝胶成像分析系统来测定每个单独条带的亮度，并在此基础上计算出条带的光密度比值（TNF-α/β-actin），见图1。012340:分子量标准DL2,000;1-4:腹部皮下及网膜脂肪组织中TNF-α和β-actin基因PCR产物。1．2．2测身高、体重，腰围（腰围测量是以腋中线肋下缘与髂骨上缘间中点水平周长）、臀围（臀围为以

6、耻骨联合水平测量臀部的最大周长），并在以上的基础上计算腰臀比例和体重指数。1．3统计学处理采用SPSS10.0统计软件进行统计学处理，组间比较采用t检验，相关因素采用线性相关分析。2结果2．1各组光密度比值之间的两两比较TNF-α基因在超重组的皮下脂肪组织表达变化较正常组略有增强，但差异无显著性(P>0.05)；TNF-α基因在网膜脂肪组织的表达变化比正常组也略有增强，差异无显著性(P>0.05)；所以说，在超重组和正常组中，皮下与网膜的基因TNF-α表达变化的差异没有统计学意义(P>0.05)。2．2TNF-α基因在皮下

7、与网膜的表达与各指标的双变量相关性分析皮下的TNF-α基因表达与I、AGE与两种组织的TNF-α基因表达没有相关性（见表1）。3讨论脂肪组织的细胞在发生肿瘤时会表达和释放一种产物叫肿瘤坏死因子，其中TNF-α基因可能存在两种分泌途径，即旁分泌和自分泌，从而刺激脂肪细胞发生分解消失，另外会通过减少LPL的生成并减弱其活性，从而生成脂肪细胞的能力变弱，还会通过干扰诱导前脂肪细胞的分化和刺激成熟脂肪细胞逆分化两种方式来阻扰脂肪细胞发生分化，从而使得前脂肪细胞和脂肪细胞的凋亡速度加快，最终防止扩大了脂肪组织的整个体积[2-3]。近年来，有一些关于T

8、NF-α基因表达与肥胖和超重的研究。首先，前人发现在肥胖组的脂肪组织中TNF-α基因表达量有所增加，而随着体重的减轻，基因TNF-α表达量随之减少[4]。然而在对人类的研究上发现