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1、探索SFRP在TAO眶脂肪组织增生中的作用 甲状腺相关眼病（thyroid-associatedophthal-mopathy,TAO）又称Graves眼病（Gravesophthal-mopathy,GO），是眼眶的炎症性免疫疾病,是Graves病（Gravesdisease,GD）最常见的甲状腺外表现，目前已知引起该病眼球突出等临床表现主要是由于眶内脂肪组织和眼外肌的膨胀. 过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisomeproliferator-activatedreceptor,PPAR-γ）在
2、脂肪化的过程中起到十分重要的作用,分泌卷曲相关蛋白（secretedfrizzled-relatedprotein,SFRP）在脂肪组织中的作用也逐渐引起研究人员的重视,且有学者发现，GO患者眶脂肪组织中SFRP1的mRNA水平与脂肪量有关.本研究主要通过检测TAO患者眶脂肪组织中SFRP、PPAR-γ的mRNA和蛋白的表达情况，初步探索SFRP在TAO眶脂肪组织增生中的作用。 资料与方法 一、临床资料 收集我院2009年至2011年诊断为TAO并行鼻内镜下眶减压术患者（病变组）眶脂肪组织，共9例（9眼），其中
3、男4例（4眼），女5例（5眼），年龄45~73岁，平均（58.3±9.2）岁。病例入选标准：①根据临床症状和体征，血三碘甲状腺原氨酸（T3）、甲状腺素（T4）及促甲状腺激素（TSH）检测，常规眼科检查及眶部CT或磁共振成像（MRI）检查等，确诊为TAO;②保守治疗后效果不佳，突眼、角膜溃疡及视力受损等未能明显改善或者视力急剧下降；③期望通过手术改善视力受损和容貌改变等情况的患者。TAO的确诊依据Bartley1995年提出的诊断标准.有眼睑退缩者，合并以下之一：①甲状腺功能异常或调节异常（包括血清T3或T4水平增高，或
4、TSH降低，或T3水平增高抑制和TSH释放激素兴奋试验异常，或血清TSH免疫球蛋白阳性）；②眼球突出；③视神经功能障碍；④眼外肌受累。无眼睑退缩者，则必须有甲状腺功能异常或调节异常，合并有眼球突出或视功能障碍或眼外肌受累之一。 收集我院眼科同期因外伤等原因需要行眼球摘除术或眼外肌矫形术的患者（对照组）术中切除的眶脂肪组织，患者均无甲状腺疾病史，共7例（7眼），其中男3例（3眼），女4例（4眼），年龄38~65岁，平均（53.1±12.5）岁。 二、方法 1.实时荧光定量PCR检测眶脂肪组织中SFRP1~5及PPA
5、R-γ的mRNA水平：用Trizol法提取组织中总RNA,紫外分光光度计上定量，RNA纯度为A260/A280=1.8~2.0.用宝生物工程（大连）有限公司（TaKaRa）反转录试剂盒反转录1μg总RNA,去基因组DNA反应条件为42℃、2min,4℃骤冷；反转录反应条件为37℃15min,85℃5s.实时荧光定量PCR目的基因及内参基因引物均由Primerpremier5.0软件跨内含子设计，由上海生工生物工程公司合成，序列详见表1.样本实时荧光定量PCR反应均做复孔，条件为预变性95℃30s;95℃变性5s,6
6、0℃退火延伸30s,共进行40个循环；采用2-ΔΔCT值对组间目的基因的相对表达量进行比较。【表1】 2.蛋白质印迹（etab,2012,26（3）：281-289. [2]ZhangL,Grennan-JonesF,LaneC,etal.Adiposetis-suedepot-specificdifferencesintheregulationofhyaluronanproductionofrelevancetoGraves'orbitopa-thy[J].JClinEndocrinolMeta
7、b,2012,97（2）：653-662. [3]NohJR,KimYH,Heproliferators-activatedreceptorγin3T3-L1preadipocytes[J].FoodChem,2013,141（2）：723-730. [4]EhrlundA,MejhertN,Lorente-CebriánS,etal.Charac-terizationoftheetab,2013,98（3）：E503-E508. [5]KumarS,LeontovichA,CoenenMJ,etal
8、.Geneex-pressionprofilingoforbitaladiposetissuefrompatientsopathy:apotentialroleforse-cretedfrizzled-relatedprotein-1
