血管周围脂肪组织在尼古丁诱导血管内皮细胞炎症反应中的作用

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1、分类号：密级：学号：20121267单位代码：10092HEBEINORTHUNIVERSITY硕士学位论文血管周围脂肪组织在尼古丁诱导血管内皮细胞炎症反应中的作用单位：河北北方学院专业：外科学研究生姓名：王超楠导帅姓名及职称:刘暴教授研究起止日期：2013.4—2015.3提交日期：2015.3河北北方学院学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北北方学院所有。河北北方学院有权对本学位论文进行交流、公开和使用。河北北方学院研究生学位论文独创性声明本论文

2、是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。目录目录中文摘要…………………………………………………………………………………………….1英文摘要…………………………………………………………………………………………….3英文缩写…………………………………………………………………………………………….6研究论文血管周围脂肪组织在尼古丁诱导血管内皮细胞炎症反应中的作用的研究前言…………………………………………………………

3、………………………………7材料与方法…………………………………………………………………………………10结果…………………………………………………………………………………………26附图…………………………………………………………………………………………32讨论…………………………………………………………………………………………45结论………………………………………………………………………………………...52参考文献……………………………………………………………………………………..53综述脂肪因子与心血管疾病的关系……………………………………….

4、59致谢……………………………………………………………………………………………..74个人简历……………………………………………………………………………………………..751中文摘要血管周围脂肪组织在尼古丁诱导血管内皮细胞炎症反应中的作用摘要目的：吸烟是动脉粥样硬化最重要的危险因素之一，烟雾中的尼古丁(Nicotine)被认为是引起心血管损害的主要物质之一。以往研究主要集中在吸烟通过直接损伤血管内皮从而引发动脉粥样硬化，近年来，多项研究证实血管周围脂肪组织（Perivascularadiposetissue,PVAT）可分泌多种细胞因子，参与PV

5、AT与血管之间的内环境调节作用。因此我们提出假设：尼古丁刺激后的血管损伤除了尼古丁对血管内皮的直接损伤外，可能还存在通过尼古丁的刺激后PVAT内分泌及旁分泌功能改变，造成细胞因子和炎症因子的分泌异常，进而影响血管壁本身的结构与功能，最终促进内膜损伤。因此，我们设计了本课题来研究尼古丁刺激条件下体外培养的血管周围脂肪细胞的脂肪因子及炎性因子水平的变化，证实上述改变对血管内皮细胞炎症反应的影响-6方法：首先单独培养脂肪细胞，将尼古丁稀释成终浓度为10-7-8mol/l、10mol/l、10mol/l。分别用上述三个浓度的尼古丁处理脂肪细胞24小时后提

6、取上清，用ELISA检测IL-1β,IL-6,TNF-α和脂联素的分泌量。利用同样浓度的尼古丁处理内皮细胞24小时后提取上清，用ELISA检测IL-1β,IL-6,TNF-α的分泌量。最后利用transwell培养板构-6建脂肪细胞-内皮细胞共培养体系后，用10mol/l浓度的尼古丁处理脂肪细胞-内皮细胞共培养体系。Western-blot方法检测NF-kB-p65的磷酸化水平,粘附因子VCAM-1、ICAM-1表达水平，再给予NF-kB抑制剂PDTC预处理共培养体系1小时后ELISA检测共培养体系中IL-1β,IL-6,TNF-α和脂联素的分泌

7、量,Western-blot方法检测粘附因子VCAM-1,ICAM-1表达水平。结果：尼古丁单独刺激脂肪细胞后，脂联素的表达量随尼古丁浓度的增加显著降低（P<0.05），IL-1β和IL-6的表达量在尼古丁浓度为-6-7-810、10mol/l时显著增加（P<0.01），10mol/l浓度时，表达量相对于-7-8对照组无变化(P>0.05)。尼古丁浓度为10、10mol/l时，TNF-α的表1中文摘要-6达量相对于对照组无变化(P>0.05)，10mol/l时，表达量相对于对照组有显著增加(P<0.01)。尼古丁单独刺激内皮细胞后，IL-1β和I

8、L-6的表达量随着尼古丁浓度的增加而增加（P<0.05）。而TNF-α的表达在各尼古丁处理组间无变化(P>0.05)。尼古丁刺激脂肪细胞