自身免疫性肝炎患者血清中高迁移率族蛋白b1检测

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1、自身免疫性肝炎患者血清中高迁移率族蛋白B1检测：赵擎，辛绍杰，侯俊，胡燕，貌盼勇【摘要】　　目的采用ELISA检测方法，初步探讨人高迁移率族蛋白B1(HMGB1)与自身免疫性肝炎(AIH)发病的相互作用关系。方法将纯化的HMGB1蛋白，包被ELISA检测微孔板，检测AIH患者和健康献血员的血清分别165份和69份，分析比较AIH患者和健康献血员的血清中抗HMGB1抗体的分泌情况。结果AIH患者血清中抗HMGB1抗体的阳性率明显高于健康献血员(78.7%VS50.7%，P<0.05)。直线回归分析显示，抗HMGB1抗体滴度(OD值)与ALT水平有

2、很好的相关性(相关系数r=0.968)。结论HMGB1是AIH疾病发生发展中一个重要的炎症蛋白，与疾病的炎症活动程度有很好的相关性。【关键词】高迁移率族蛋白B1自身免疫性肝炎ELISA　　Abstract:　　ObjectiveAdaptionthemethodofELISA,investigationtherelationshipbetanhighmobilitygroupbox-1protein(HMGB1)andautoimmunehepatitis(AIH).MethodsCoatingthemicroofthe165AIHand69heal

3、thyrespectively.parisonthelevelofAnti-HMGB1antibodyinAIHandthehealthy.ResultsThepositiveratioofAnti-HMGB1antibodyinAIHmorethanthatinhealthy(78.7%VS50.7%，P<0.05),ThelinearregressionanalysisshomatoryproteinintheprogressingofAIH,therearegoodcorrelationbetmationinAIH.　　Keyobilit

4、ygroupbox-1protein（HMGB1）；autoimmunehepatitis（AIH）；ELISA　　血循环中自身抗体的检测是自身免疫性肝炎(AIH)诊断和分型的主要依据。但自身抗体的检测并不能完全排除其他原因引起的肝脏病变，药物性肝炎、病毒感染等也可产生相应的自身抗体[1]。高迁移率族蛋白(HMG)是存在于真核生物细胞内的一类非组蛋白染色体结合蛋白[2]。研究显示HMGB1是p-ANCA的一种新型靶抗原分子，AIH患者体内抗HMGB1抗体的阳性率达89%;在p-ANCA阳性的AIH患者体内，抗HMGB1抗体的阳性率为96%，两者具有很

5、好的相关性[3]。本实验将前期实验纯化所得的HMGB1蛋白[4]，包被ELISA检测微孔板，检测AIH患者的血清共计165份，分析比较AIH患者和健康献血员的血清中抗HMGB1抗体的分泌情况，初步探讨HMGB1蛋白与AIH发病的相互作用关系。　　1　材料和方法　　1.1　标本　收集302医院2002年至2006年临床诊断为AIH患者的血清共计165份，健康献血员的血清由302医院输血科提供。　　1.2　主要试剂　人重组HMGB1蛋白，小鼠抗人HMGB1抗体购自美国Sigma公司。辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG，辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG由解放军3

6、02医院病毒研究室提供。显色液A液、B液、终止液购自北京科卫临床诊断试剂公司。枸橼酸盐缓冲液(0.01MpH6.0)，抗体稀释液，DABKit(20×)购自北京中杉生物技术公司。　　1.3　ELISA试验步骤　将纯化所得HMGB1蛋白与CB包被液按1∶200的比例混匀，加入微孔板中，每孔加入100μl，4℃静置过夜孵育。用PBST洗涤液洗板2次。每孔加100μl封闭液，37℃孵育封闭1h。用PBST洗涤液洗板2次。每孔加入(50-100)μl待测血清样品稀释液(血清稀释比例为1∶100)，37℃孵育45min。PBST洗涤液洗板5次。依次在每孔中加显

7、色液A液、B液各50μl，混匀，37℃避光孵育10min。依次在每孔中加入终止液50μl，混匀。酶标仪对空白孔调零，单波长450nm读取各孔的OD值。　　1.4　统计学处理　采用CHISS统计软件，数据采用卡方检验和直线相关分析。　　2　结果　　规定OD值大于2×cutoff值的为阳性结果。统计学分析结果显示，AIH患者血清中抗HMGB1抗体的阳性率明显高于健康献血员(78.7%VS50.7%)(x2=18.4286，P<0.001)，有统计学意义。并且，直线回归分析显示，抗HMGB1抗体滴度(OD值)与ALT水平有很好的相关性(相关系数r=0

8、.968，图1)。　　3　讨论　　AIH是一种肝脏的炎症性疾病，特点为具有肝病和(或)非特异性的体质性临床表