柑橘不同部位中柠檬苦素的分布及含量分析

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1、柑橘不同部位中柠檬苦素的分布及含量分析吴今人１ａ，耿平１ａ，胡田叶１ａ，霍晨曦１ａ，江海１ａ，1ｂ，郭念文２，刘惠钧３（１．陕西理工学院，ａ．生物科学与工程学院；ｂ．陕西省资源生物重点实验室陕西汉中７２３００1；２．陕西泛亚绿色食品有限公司，陕西城固７２３２００；３．陕西省城固酒业有限公司，陕西城固７２３２００）摘要：利用ＵＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ检测柑橘不同部位中的柠檬苦素含量，以了解柑橘中苦味物质的分布规律，从而为柑橘产品深加工提供依据。试验采用色谱柱ＷａｔｅｒｓＡＣＱＵＩＴＹＢＥＨＣ１８（５０ｍｍ×２．５ｍｍ，１．９μｍ）；流动相：Ａ为乙腈，Ｂ

2、为纯水，梯度洗脱，乙腈梯度为１０％（０ｍｉｎ）－５０％（３ｍｉｎ）－１０％（４ｍｉｎ）－１０％（５ｍｉｎ）；流速０．３ｍＬ／ｍｉｎ、柱温４０℃、进样量５μＬ、检测时间５ｍｉｎ；正离子模式（ＥＳＩ＋）质谱检测器：柠檬苦素母离子ｍ／ｚ＝４７１．１；定性离子ｍ／ｚ＝４２５．３，定量离子ｍ／ｚ＝１６１．１；等等。结果表明，柑橘不同部位中柠檬苦素的含量差异显著，橘茎、橘叶、橘花、橘皮、橘络、橘肉、橘子的柠檬苦素含量分别为９８０．５±１５．８、８８０．０±１０．２、２５００．０±３０．５、７６８．４±９．６、１７８０．０±２０．５、２２０．２±８．１、３２

3、００．０±３５．１ｍｇ／ｋｇ。说明柑橘中柠檬苦素主要分布于橘花、橘络、橘子中，可以通过橘花、橘子提取；所以在柑橘加工过程里，为避免苦味的产生，应尽量剔除橘络和橘子。.jyqkm×５０ｍｍ，１．9μｍ），柱温４０℃，流速０．３ｍＬ／ｍｉｎ，进样５μＬ。流动相为水与乙腈梯度洗脱，乙腈梯度为１０％（０ｍｉｎ）－５０％（３ｍｉｎ）－１０％（４ｍｉｎ）－１０％（５ｍｉｎ）。１．２．４质谱条件毛细管电压３．２ｋＶ，锥孔电压４０ｋＶ，离子源温度１１０℃，脱溶剂气温４００℃，锥孔气流量５０Ｌ／ｈ，脱溶剂气流量８００Ｌ／ｈ。离子化模式为大气压电喷雾离子源正离子模

4、式（ＥＳＩ＋），碰撞池电压（ｃｏｌｌｉｓｉｏｎＶ）３０Ｖ，碰撞氩气流速０．１４ｍＬ／ｍｉｎ。采用多反应监测（ＭＲＭ）方式。１．２．５标准曲线制备在仪器设定的色谱－质谱条件下，进标准梯度溶液各５．０μＬ，ＭＲＭ检测柠檬苦素母离子ｍ／ｚ＝４７１．１，定性离子ｍ／ｚ＝４２５．３，定量离子ｍ／ｚ＝１６１．１。以定量离子ｍ／ｚ＝１６１．１峰面积为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制标准工作曲线。１．３试验方法学评价１．３．１精密度试验取柑橘同一部位材料样品，按１．２．１方法制备样品，在色谱－质谱条件下平行测定５次，每次进样５μＬ，测定柠檬苦素的峰面积，计算

5、相对标准偏差（ＲＳＤ），考察方法的精密度。１．３．２重复性试验取柑橘同一部位材料样品，按１．２．１方法平行制备５个样品，在色谱－质谱条件下测定，每个样进样５μＬ，测定柠檬苦素的峰面积，计算相对标准偏差（ＲＳＤ），考察方法的重复性。１．３．３稳定性试验取柑橘同一部位材料样品，按１．２．１方法平行制备５个样品，在色谱－质谱条件下测定，分别于０．５、１、６、１２、２４ｈ进样５μＬ，检测柠檬苦素的峰面积，计算相对标准偏差（ＲＳＤ），以考察方法的稳定性。１．３．４回收率试验精密量取已测定柠檬苦素为2500mg/kg的柑橘各部位样品０．２ｇ，加入６０．０ｍ

6、ｇ／Ｌ的标准对照母液３．０ｍＬ（１８０μｇ），按１．２．１方法制备样品，在色谱－质谱条件下平行进样３次，每次进样５μＬ，以标准曲线计算其含量，通过加标回收率公式计算各样品的回收率。１．３．５定量限试验将含柠檬苦素０．１２ｍｇ／Ｌ的标准溶液逐级稀释，在液相质谱分析条件下进样分析，以ＲＳ/Ｎ＝１０确定柠檬苦素的定量限。２结果与分析２．１标准曲线的确定试验标样的色谱－质谱图见图１，以标准溶液浓度为横坐标，定量离子ｍ／ｚ＝１６１．１峰面积为纵坐标，拟合标准工作曲线，得到柠檬苦素线性回归方程：ｙ＝６２０．７８ｘ＋８０．２４，其相关系数ｒ＝０．９９８７。该

7、检测条件下，柠檬苦素在０．３０～１２．００ｍｇ／Ｌ之间线性关系良好。２．２方法学评价２．２．１精密度试验在色谱－质谱条件下，按精密度试验方法测得柑橘茎样品（柠檬苦素含量３．９２ｍｇ／Ｌ）的柠檬苦素峰面积分别为２５６８．１２、２５１３．４５、２４５６．２３、２５９８．６４、２４１０．５５，计算得到其相对标准偏差（ＲＳＤ）为３．０９％。同理测得柑橘其他部位样品的相对标准偏差（ＲＳＤ）分别为：柑橘叶２．８４％、花２．３１％、皮３．３６％、果肉４．０８％、橘络２．１７％、橘子１．９５％，不难看出，在所有精密度试验中，相对标准偏差（ＲＳＤ）都小于５％，表

8、明在该条件下采用的方法精密度良好。２．２．２重复性试验在色谱－质谱条件下按重复性试验的方法测得平行处理的５个柑橘茎样品中柠檬苦素的峰面积分别为２６１２