HPLC法分析贯叶连翘不同部位中金丝桃素的含量 .doc

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1、HPLC法分析贯叶连翘不同部位中金丝桃素的含量摘要用HPLC法测定贯叶连翘根、茎、叶、花、果中金丝桃素的含量；结果表明花中含量最高，茎中含量甚微。关键词：贯叶连翘；金丝桃素；不同部位；HPLC　　贯叶连翘HypericumperforatumL.为藤黄科金丝桃属植物，药理实验证明其主要成分金丝桃素具有抗病毒、抗炎及抗肿瘤作用，对人体激活白细胞的免疫功能有抑制作用〔1〕。目前以金丝桃素含量为贯叶连翘定量指标。我们建立了HPLC法，并测定了几个产区的贯叶连翘原植物根、茎、叶、花、果中金丝桃素的含量，以指导药材的采收和金丝桃素生产原料的质量控制。1　仪器与试药1.

2、1　仪器　HPLC仪(美国Perkin-Elmer公司)；LC-295型紫外可见检测器；Series200泵；Plus-1022色谱工作站。1.2　试药　乙腈(色谱纯)；金丝桃素对照品(Sigma公司，批号97071503)；贯叶连翘(Hypericum.PerforatumLinn)全草(7月下旬至9月上旬采集)。2　方法与结果2.1　色谱条件　色谱柱：Nova-PakODS(4.6mm×200mm)；流动相：甲醇∶乙腈∶0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲液(400∶100∶100)；流速：1ml/min；检测波长：588nm；Range：0.05AUFS；

3、进样量：10μl，金丝桃素保留时间11min。2.2　供试液的制备　将原药材各部位样品分别粉碎，使全部过60目筛。精密称取约1g，用甲醇-吡啶(90∶10)20ml超声提取1h，放冷至室温，最后定容于25ml量瓶中，用0.45μm滤膜滤过，滤液即为供试液。精密称取金丝桃素对照品，用吡啶-甲醇(1∶9)溶解并稀释为0.01mg/ml的溶液，作为对照品溶液。2.3　提取溶媒的选择　金丝桃素为多酚羟基双蒽酮类，在甲醇中加入一定吡啶使提取溶剂呈弱碱性，有利于金丝桃素的溶出。2.4　提取时间　对同一药材样品分别加入吡啶-甲醇溶液20ml超声提取15，30，45，60，

4、90min后测定，表明45min以后金丝桃素的含量测定结果趋于稳定(15%)，考虑超声时间过长溶剂升温，故采取超声1h为宜。2.5　标准曲线的制备　分别吸取0，2.5，5，10，15，20μl的金丝桃素对照品溶液进样，以峰面积对进样量回归得方程：y＝38707x－8804，r＝0.9991。　　同法取供试品溶液测定。结果见表1。取同一药材测定9次，RSD＝3.30%。表1　不同产地贯叶连翘各部位的含量产　地花叶茎3根果实全草甘肃文县0.0720.0460.002未检出0.028甘肃康县0.0900.035未检出未检出0.039湖南龙山0.0580.0370.

5、007未检出0.0190.019贵州毕节0.0570.0360.003未检出0.0090.022陕西丹凤0.0860.033未检出未检出0.0183湖北恩施0.0850.040未检出未检出0.015四川达川0.0500.035未检出未检出0.0182.6　加样回收试验　精密称取药材粉末3份，分别加入不同量的金丝桃素对照品，按样品测定方法操作，金丝桃素平均回收率为100.3%，RSD＝4.17%。3　讨论　　①金丝桃素含量测定可用薄层扫描法〔2〕或HPLC法，荧光检测并配合梯度洗脱〔3〕。本文建立的HPLC法使用紫外检测器，且为等度洗脱，较上述方法简便、实用，

6、具有较强的可操作性。　　②从含量测定结果可知：金丝桃素在花中含量最高，叶次之，果实含量低，茎中含量甚微，根中未检出金丝桃素。故应在花期采收地上部分，弃去茎干；药材质量以花叶多者为优。参考文献〔1〕　EzioBombardelli,PaoloMorazzoni.Hypericumperforatum.Fitoterapia,1995(1):43〔2〕　KartnigThandGbelI.Determinationofhypericinandpseudohypericinbythinlayerchromatography-den-sitometry.JChrom

7、otogr,1992(609):423〔3〕　GiuseppeMicali,FrancescoLanuzza,PaolinaCurro.Highperformanceliquidchromatographicdeterminationofthebiologicallyactiveprinciplehypericininphytotherapeaticvegetableextractsandalcoholicbeverages.JChromotogr,1996(731):3363