模拟缺血-再灌注诱导人离体胃黏膜上皮细胞的凋亡

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1、模拟缺血/再灌注诱导人离体胃黏膜上皮细胞的凋亡作者：石玥，乔伟丽，王光明，吴金霞，闫长栋，张建福【摘要】目的模拟缺血/再灌注诱导人离体的胃黏膜上皮细胞损伤模型，观察再灌注不同时间点胃黏膜上皮细胞凋亡情况并分析其规律。方法采用人胃黏膜上皮细胞株进行体外培养并传代，细胞以缺氧(5%CO2、1%O2、94%N2)+无糖KR液模拟缺血、缺氧，复氧、复糖模拟再灌注诱导胃黏膜上皮细胞凋亡，用流式细胞仪、Hoechst33258染色法观察正常对照组及模拟损伤组于模拟缺血1h，再灌注3、6、12h细胞凋亡的情况及变化规律。结果①胃黏膜上皮细胞12～24h贴壁，24h后有少量上皮样细胞从周边爬

2、出，48h后细胞呈指数样生长，72h后细胞已基本能达到融合。②模拟胃缺血/再灌注后细胞凋亡率于缺血1h、再灌注6h时出现高峰，且与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。经Hoechst33258染色，荧光显微镜下观察可见细胞于缺血1h、再灌注6h时产生典型的凋亡形态学变化如核浓染、核碎裂、边集等。结论成功模拟了缺血/再灌注诱导人离体的胃黏膜上皮细胞损伤模型;该损伤模型可引起胃黏膜上皮细胞的凋亡，且在缺血1h、再灌注6h时为高峰。【关键词】胃缺血/再灌注;胃黏膜上皮细胞;细胞凋亡;细胞培养　　Abstract:ObjectiveTosimulatetheisch

3、emia/reperfusion-inducedinjurytotheepithelialcellsofgastricmucosaandtoinvestigatethecellularapoptosisatdifferenttimepointsinordertoexploreitsregularity.MethodsHumangastricepithelialcelllineulateconditionsofischemiaandhypoxia,reoxygenationandglucoserEintroduction.Themorphologicalchangesandth

4、epercentageofapoptoticcellsetry(FCM)atreperfusive3,6and12hsecondaryto1hsimulatedischemiaculture.Results①Observationundertheinvertedmicroscoperevealedthegastricmucosaepithelialcelladherenceafter12to24h;andat24thh,thereulatedischemic1handreperfusive6h,icroscopyrevealedtypicalmorphologicalchan

5、gesofapoptoticcellsincludinghyperchromaticnuclEI,karyorrhexis,margination,etc.atischemic1handreperfusive6h.ConclusionTheischemia/reperfusion-inducedapoptosisofhumangastricmucosalepithelialcellsculturedinvitroulated.Thisinjurymodelisabletoinduceapoptosisofgastricmucosalepithelialcellsepointo

6、freperfusive6thhsecondarytoischemic1sth.　　Keyia-reperfusion;gastricmucosaepithelialcell;cellapoptosis;cellculture　　胃缺血/再灌注(gastricischemia-reperfusion,GI/R)损伤是一种常见的临床病理生理过程，临床发生多器官障碍综合征时，由于血液的重分布造成的胃肠黏膜缺血出现的最早最明显，远比其他脏器更易发生缺血-再灌注损伤，因此，胃被认为是机体内最早受累的器官[1-2]。胃黏膜虽易损伤，但其修复快，它是机体内自身代谢最快的组织之一，这表明胃

7、黏膜细胞可能具有较强的抗凋亡调控机制和增殖修复能力。深入研究GI-R的胃黏膜上皮细胞凋亡、增殖及其分子机制不仅有利于GI-R的防治，而且对于器官缺血/再灌注损伤理论的深入具有重要意义。　　以往研究多是采用夹闭腹腔动脉导致胃缺血/再灌注损伤的在体模型[3-4]，但由于体内环境的复杂性，在体研究受到诸多因素的干扰，也难以特异性地针对胃黏膜某一细胞进行研究。故对于离体胃黏膜上皮细胞缺血-再灌注后损伤的研究具有十分重要的意义。本研究采用人胃黏膜上皮细胞株经体外培养及传代后建立模拟缺血/再灌注细胞损伤模型，观察在