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《抗人可溶性间皮素相关蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、抗人可溶性间皮素相关蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定作者：陈书成,刘雅坤,吴小华，单保恩,陈兴,孙东霞,王莉【关键词】间皮素;,可溶性间皮素相关蛋白;,B细胞表位;,单克隆抗体 PreparationandcharacterizationofthemonoclonalantibodyagainsthumansolublemesothelinrelatedprotEins DepartmentofObstetricsandGynaecology,theFourthHosipitalofHebEIMedicalUnive
2、rsity,ResearchCenteroftheFourthHosipitalofHebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050011;BethuneInternationalPeaceHosipital,Shijiazhuang050000,China [Abstract]AIM:Topreparethemonoclonalantibody(mAb)againsthumansolublemesothelinrelatedproteins(SMR)andidentifyitsprope
3、rties.METHODS:TheBcellepitopesofmesothelin(MSLN)ultiparameterpredictionmethod.ThenBALB/cmicemunizedAbbyhybridomatechnique.ThespecificityofantibodymuocytochemistryandRAb2H10muocytochemistryandResothelin;solublemesothelinrelatedproteins;Bcellepitopes;monoclonalant
4、ibody [摘要]目的:制备鼠抗人可溶性间皮素相关蛋白（SMR）的单克隆抗体(mAb),鉴定其生物学特性。方法:应用计算机通过综合预测对间皮素(MSLN)进行B细胞表位预测。合成相应肽段并免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,利用免疫细胞化学和SLN）是一种相对分子质量（Mr）约为40000的细胞表面糖蛋白,在间皮瘤、卵巢癌、胰腺癌等恶性肿瘤中高表达[1,2]。间皮素cDNA编码Mr为69000的前体蛋白,糖基化后被蛋白酶水解为40000和31000的片段,其中40000的片段通过糖基磷脂酰肌醇（glyc
5、osylphosphatidylinositol）与胞膜相连,称为间皮素;Mr31000的片段脱落后称为巨核细胞集落刺激因子(megakaryocytepotentiatingfactor)[2]。间皮素包括两个异构体,其中异构体2由于保留了第16和17外显子间的内含子,使其蛋白翻译提前终止,从细胞表面脱落形成可溶性间皮素（solublemesothelinrelatedproteins,SMR）,Mr为42000～45000[3]。癌组织中间皮素阳性表达的恶性肿瘤患者,其血清和腹水中可以检测到SMR的存在,从而使之有
6、可能成为新的恶性肿瘤监测指标[4]。但到目前为止,国内仍无可以检测SMR的ELISA试剂盒。基于这一目的,本研究中选择性地合成了鼠抗人SMR的多肽制备其单克隆抗体（mAb）,并对其生物学特异性进行了鉴定。 1材料和方法 1.1材料GOLDKEY核酸和蛋白质分析软件及核酸和蛋白质数据库光盘,由中国军事医学科学院基础研究所提供。卵巢浆液性囊腺癌细胞系OVCAR3、浆液性乳头状囊腺癌细胞系SKOV3及卵巢上皮性癌细胞系3AO均为本院科研中心冻存。Sp2/0骨髓瘤细胞株为解放军国际和平医院试验中心冻存。BALB/c小鼠(鼠
7、龄6～8周,质量18～25g)购自河北医科院实验动物中心。DMEM培养基、RPMI1640培养基为美国GIBCO公司产品。胎牛血清为杭州四季青公司产品。小鼠SP检测和DAB显色试剂盒购于北京中杉金桥公司。蛋白提取试剂盒和proteinmarker为赛百盛公司产品。考马斯亮蓝蛋白检测试剂盒为南京建成生物工程研究所产品,mAb分型试剂盒购于美国Boehriger公司。 1.2方法 1.2.1单参数预测、综合预测及抗原肽合成应用GOLDKEY软件分析间皮素氨基酸序列全长,应用4个主要参数:HoppRmAb的制备应用硝酸纤
8、维素膜剪成02×05cm,在含SMR复合肽抗原的溶液中浸泡过夜,应用包埋法背部皮下免疫BALB/c小鼠。分别于初次免疫后14d、28d后进行两次加强免疫,方法同第1次,末次免疫后3d,在无菌条件下取出脾脏,研磨使脾细胞游离,GKN缓冲液洗涤,1000r/min离心5min,弃上清,重复离心1次,沉淀的细胞用10mL无血清DMEM培
