hplc法测定肾炎四味胶囊中黄芩苷的含量

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1、HPLC法测定肾炎四味胶囊中黄芩苷的含量【摘要】目的探讨肾炎四味胶囊中黄芩的主要有效成分黄芩苷含量测定方法。方法采用高效液相色谱法：色谱柱：KromasilC18（150mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇－水－磷酸溶液（47∶53∶0.2）；流速：1.0mL/min；检测波长：280nm；柱温：35℃。结果黄芩苷在进样量为0.1992～0.9960μg范围内线性关系良好，r=0.9995；黄芩苷的回收率为98.40%，RSD为1.78%；3批肾炎四味胶囊平均含黄芩苷25.4mg/粒，RSD＝0.99％。结论该方法灵敏度高，重复性好，可作为肾炎

2、四味胶囊中黄芩苷的含量测定方法。【关键词】肾炎四味胶囊；黄芩苷；HPLC法；含量测定1实验材料1.1仪器高效液相色谱仪（岛津LC－10ATvp，日本岛津公司）；N-3000色谱工作站。1.2试药甲醇为色谱纯试剂，水为重蒸水，其它试剂均为分析纯；黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号0715-200211）；肾炎四味胶囊（湖北午时药业股份公司，批号20060404、20060406、20060408）。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：KromasilC18（150mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇－水－磷酸溶液（47∶53∶

3、0.2）；检测波长：280nm；流速：1.0mL/min；柱温：35℃。2.2供试品溶液的制备取本品装量差异项下的内容物，混匀，取约0.1g，精密称定，加70%乙醇100mL，称定质量，超声（功率80in，放冷，加70%乙醇补足减失的质量，摇匀，用0.45μm的膜滤过即得。2.3空白溶液的制备取除黄芩外的其余处方量饮片，按制备工艺方法制备缺黄芩的空白样品，按上述供试品溶液制备方法制成缺黄芩的空白溶液。2.4对照品溶液的制备精密称取黄芩苷对照品9.96mg，置100mL量瓶中，加70%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取5mL，置10mL量瓶中，加

4、70%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL中含黄芩苷49.8μg）。2.5空白干扰试验分别精密吸取对照品溶液、空白溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定,得色谱图（见图1）。结果表明，在与黄芩苷对照品色谱峰相同位置上无峰出现，说明缺黄芩空白对照对测定无干扰。2.6线性关系考察精密吸取浓度为99.6μg/mL的黄芩苷对照品溶液2、4、6、8、10mL，分别置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取10μL进样，测定其峰面积积分值，结果见表1。以浓度(μg)对峰面积积分值进行线性回归，其回归方程为：Ａ＝1.995×106Ｃ－6540，

5、r＝0.9995。结果表明黄芩苷在0.1992～0.9960μg范围内具有良好的线性关系。2.7精密度试验精密吸取同一份供试品溶液10μL，重复进样5次，测定黄芩苷峰面积积分值，分别为1045128、1052125、1046985、1056248、1049652，RSD为0.42%。结果表明：该仪器精密度良好。2.8稳定性试验分别精密吸取同一份供试品溶液10μL，于0、3、6、9、12h进样，测定其峰面积积分值，分别为1056325、1052125、1048628、1050325、1061254，RSD为0.48%。结果表明，供试品溶液在12h内基

6、本稳定。2.9重复性试验取同一批号样品（批号20060404）5份，按上述条件依法平行处理并测定黄芩苷含量，分别为25.10、25.16、25.42、25.16、24.47mg/粒，RSD为1.41%。结果表明本法重复性好。2.10回收率试验精密称取已知含量为49.91mg/g（批号20060404）样品0.05g，共5份，分别精密加入黄芩苷对照品溶液（0.261mg/mL）10mL，再按“2.2”项下方法制备供试液，精密吸取10μL注入液相色谱仪，测定黄芩苷含量，结果表明，本法加样回收率好。结果见表2。2.11成品及饮片含量测定按上述含量测定方法

7、测定3批（批号分别为：20060404、20060406、20060408）样品中黄芩苷的含量，含量为25.1、25.4、25.6mg/粒，n=3；平均25.4mg/粒，RSD＝0.99％。取黄芩饮片细粉约0.3g，照《中国药典》2005年版一部黄芩项下的含量测定法依法测定，其含量分别为9.2%、10.3%、9.7%。结果表明：投料所用饮片符合《中国药典》2005年版一部规定黄芩中黄芩苷的含量不得少于9.0%的规定[2]211。3结论肾炎四味片系《卫生部药品标准》中药成方制剂第12册收载的品种[3]。具有活血化瘀，清热解毒，补肾益气的功能；主要用于

8、治疗慢性肾炎。原剂型为片剂，由于片剂存在崩解时间长，溶出速率慢，其生物利用度较差，且日服用量为24片，服用量大，病人不易接