erk和p38信号转导途径对慢性髓系白血病细胞周期的调控作用

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1、ERK和P38信号转导途径对慢性髓系白血病细胞周期的调控作用作者：郭晓　潘崚　侯兰芬　王友君　郭宏谋　杨琳　王志伟　孙宇　李栋梁【摘要】　　本研究探讨ERK和P38信号转导途径对慢性髓系白血病（CML）细胞周期的调控作用。以RTPCR、方法分别检测CML患者白血病细胞和K562细胞中ERK、p38、cyclinD2、cyclinE、p27的mRNA表达及蛋白表达（其中ERK和P38为磷酸化ERK和磷酸化P38）及细胞周期分布，并分析其相关关系。结果表明：CML患者白血病细胞和K562细胞中ER

2、K、P38、cyclinD2、cyclinE的mRNA表达和蛋白表达增高，P27的表达降低，且cyclinD2蛋白表达与cyclinE、ERK和P38蛋白表达呈正相关(P<0.01)，与P27蛋白表达呈负相关(P<0.01)。G0/G1期细胞减少，S期细胞增多，与对照组相比有显著性差异。结论：CML中P38、ERKmRNA表达和活性增加，激活下游的cyclinD2、cyclinE和P27等细胞周期调控因子，致使G0/G1期缩短，细胞快速通过G1/S转换点进入S期，加速细胞周期进程和细

3、胞增殖，导致CML的发生。【关键词】ERK信号转导途径　P38信号转染途径；信号转导途径；慢性髓系白血病　　RegulativeEffectsofERKandP38SignalTransductionPathiaAbstractThisstudyedtoinvestigatetheregulativeeffectofERKandp38signaltransductionpathRNAandprotEinexpressionofERK,p38,cyclinD2,cyclinEandp27(ERKa

4、ndp38inedbyFCM,andthEIrrelationshipRNAandproteinexpressionsofERK,p38,cyclinD2andcyclinEinCMLcellsandK562cellsincreased(P<0.01)andtheexpressionofp27decreased(P<0.01).ThereRNAexpressionandproteinactivityofERKandp38activatethecellcycleregulatingp

5、roteinssuchascyclinD2,cyclinE,p27yeloidleukemia慢性髓系白血病(CML)的分子生物学特点是存在bcr/abl融合基因，表达具有高酪氨酸激酶活性的BCR/ABL融合蛋白，它通过相关信号转导途径，影响下游的细胞周期调控分子的表达水平，进而扰乱细胞周期，与白血病细胞恶性生长和增殖有密切关系［1］。CyclinD2、cyclinE和P27是BCR/ABL通过相关信号转导途径调节细胞周期的重要靶蛋白，但其具体作用机制不清。本研究拟对CML细胞中cyclinD2

6、、cyclinE和p27的表达状况及其与丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）信号转导途径的信号分子磷酸化p38、ERK表达的相互关系进行研究，以求进一步揭示ERK和p38信号转导途径对慢性粒细胞性白血病细胞周期的调控作用，为CML临床治疗的进一步探讨提供初步的理论基础。临床资料30例BCR/ABL阳性的CML慢性期患者，均按国内标准［1］、经临床血液学及细胞遗传学、分子生物学检查确诊。30例中，男性19例，女性11例，中位年龄47（38-64）岁。初治21例，曾用羟基脲、干扰素治疗9例（治疗最长7年，

7、最短1月）；另选20例健康人，作为正常对照，其中男性11例，女性9例，中位年龄38（26-60）岁。临床标本和细胞培养分别抽取患者和健康人新鲜骨髓5ml，肝素抗凝，制作6张骨髓片，其余骨髓加等量PBS稀释，用Ficoll淋巴细胞分离液（密度1.077）分离单个核细胞。获取的单个核细胞直接用于实验检测或保存于-80℃冰箱备用。K562细胞株由本院中心实验室提供，置于含有15%小牛血清的RPMI1640培养液中，在37℃、5%CO2、饱和湿度的恒温孵育箱中培养，采用对数生长期细胞进行实验。细胞周期的

8、流式细胞术检测分别取CML患者、健康人的骨髓单个核细胞和K562细胞各5×106个，用PBS洗3遍，所得细胞用70%乙醇固定，不含DNA酶的RNA酶处理，碘化丙锭（PI）染色后进行流式细胞仪检测，并对获取数据进行细胞周期分析。各组细胞中相关蛋白表达水平的L患者、健康人的骨髓单个核细胞和K562细胞各5×106个，加入1ml蛋白裂解液(50mmol/LTrisHClpH=8.0、150mmol/LNaCl、100mg/LPMSF、1mg/Laprotinin、1%NP40、0.1%SDS)，充