二至丸加味方对d半乳糖所致衰老模型大鼠体内自由基和免疫功能的影响

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1、二至丸加味方对D半乳糖所致衰老模型大鼠体内自由基和免疫功能的影响池凤好，陈媛媛，范瑞强【摘要】　　【目的】观察二至丸加味方对衰老模型大鼠体内自由基和免疫功能的影响。【方法】选用2.5月龄SD大鼠60只，随机分为5组：正常对照组，模型组，二至丸加味方高、中、低剂量组（剂量分别为11.5、7.0、3.5g·kg-1·d-1）；除正常对照组以外，其他组均采用D半乳糖300mg·kg-1·d-1腹腔注射2个月复制亚急性衰老模型，二至丸加味方各组分别按设计剂量连续灌胃给药2个月。检测各组大鼠全血超氧化物歧化酶（S

2、OD）、丙二醛（MDA）、血清白细胞介素2（IL2）水平和脾脏指数。【结果】模型大鼠全血SOD、血清IL2水平以及脾脏指数均显著性降低，而血清MDA水平显著性升高（均Ｐ＜０.０５）；二至丸加味方高、中、低剂量组均可不同程度地升高SOD、IL2水平及脾脏指数，降低MDA水平（P＜0.05或P＜0.01）。【结论】二至丸加味方抗衰老的作用可能与其能清除自由基、提高机体免疫功能有关。【关键词】二至丸加味方／药理学衰老／中药疗法衰老/免疫学自由基／血液疾病模型动物大鼠　　机体衰老的一个明显的表现就是皮肤的衰

3、老，其不仅有损美容，而且与许多皮肤病的发生有着病因学的联系，如何预防和延缓皮肤衰老成为生命科学研究的热点。二至丸加味方具有滋补肝肾、补中益气、活血养颜等功效，临床观察具有抗皮肤衰老作用〔1〕。本研究观察了二至丸加味方对D半乳糖所致衰老模型大鼠体内自由基和免疫功能的影响，现报道如下。　　1材料和方法　　1.1动物与分组选用2.5月龄SD雄性大鼠（SPF级）60只，体质量280～300g，由广东省医学实验动物中心提供，合格证号：SCXX（粤）20030002。饲养环境安静，室温（20±1）℃，自然照明，以标

4、准实验大鼠全价颗粒饲料、符合清洁实验室要求的净化自来水喂养。所有大鼠随机分为5组，每组12只，即正常对照组，模型组，二至丸加味方高、中、低剂量组。　　1.2药物二至丸加味方（女贞子、旱莲草、黄芪、丹参等）药物由广东省中医院番禺制剂室制备，将其浓缩成5.3g/mL（以生药计），高压灭菌，4℃冰箱保存备用，实验中用灭菌蒸馏水配成1kg/L的溶液；D半乳糖购于广州威佳科技有限公司（批号：2K06D518），用灭菌蒸馏水配成100g/L的溶液。　　1.3试剂与仪器超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、蛋白定

5、量试剂盒均购于南京建成生物制品研究所；白细胞介素2（IL2）试剂盒购于深圳晶美生物工程有限公司；JJ电动玻璃匀浆器（江苏金坛市佳美仪器厂）；Biofuge28RS低温高速离心机（德国Heraeus公司）；CARY100紫外分光光度计（澳大利亚瓦里安公司）；BioRADMode1550nm酶标仪（美国）；GRANTSUB14恒温水浴箱（英国Grant公司）。　　1.4造模〔2〕及给药方法正常对照组大鼠每天给予生理盐水1mL腹腔注射，其他各组给予100mg/LD半乳糖300mg·kg-1·d-1腹腔注射

6、，连续2个月。正常对照组、模型组以生理盐水2mL/d灌胃；二至丸加味方高、中、低剂量组分别按11.5、7.0、3.5g·kg-1·d-1剂量灌胃给药，连续2个月。　　1.5观察指标大鼠用乙醚麻醉，眼眶底静脉取血，用抗凝管接取测定全血SOD、MDA含量，具体操作步骤按试剂盒说明书。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定血清IL2水平。大鼠称体质量，用100g/L的水合氯醛溶液2mL腹腔注射麻醉，取出脾脏，用生理盐水洗净，剥离表面结缔组织等，滤纸吸干水分，电子天平称质量，计算脾脏指数：spleen/mbody。　　

7、1.6统计学方法采用microsoftofficeexcell2003版软件进行数据的统计分析。　　2结果　　各组对大鼠全血SOD、MDA及血清IL2水平、脾脏指数的影响表1结果显示，模型组与正常对照组比较，全血中的MDA水平显著性升高，全血SOD、血清IL2水平以及脾脏指数均显著性降低（均P＜0.05），提示D半乳糖亚急性大鼠衰老模型复制成功。与模型组比较，二至丸加味方中剂量组可显著性升高SOD活性（P＜0.01）；二至丸加味方低剂量组可显著性提高SOD活性、血清IL2水平和脾脏指数，降低MDA水

8、平（均P＜0.05）；二至丸加味方高剂量组可显著性升高衰老大鼠的脾脏指数（P＜0.05）。　　表1各组对大鼠全血SOD、MDA及血清IL2水平、脾脏指数的影响（略）　　Table1parisonofIL2levelasans〔Ｊ〕．MechAgingDev,1985,32：213．　　〔5〕ProvincialiM,ArgentatiK,TibaldiA.Efficacyofcancergenetherapy