何首乌饮对d半乳糖所致衰老大鼠下颌下腺egf、egf mrna表达的影响的论文

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1、何首乌饮对D半乳糖所致衰老大鼠下颌下腺EGF、EGFmRNA表达的影响的论文何首乌饮对d半乳糖所致衰老大鼠下颌下腺egf、egfmrna表达的影响【关键词】何首乌饮;衰老大鼠;下颌下腺;egf;egfmrna【摘要】目的观察何首乌饮对衰老大鼠下颌下腺表皮生长因子(egf)及egfmrna表达的影响。方法采用d半乳糖衰老大鼠模型，何首乌饮干预分为治疗和预防两部分，用免疫组化及原位杂交法检测下颌下腺egf、egfmrna阳性表达的改变。结果预防性实验部分egf、egfmrna表达以正常组最高，模型组最低，各预防组中预防中剂量组最高，组间比较有高度统计学意义(p<0.

2、01)。治疗性实验部分以正常组最高，自然恢复组最低，各治疗组中以治疗中剂量组最高，组间比较差异显著(p<0.01)。结论何首乌饮可提高下颌下腺egf、egfmrna的表达而达到抗衰老的作用。【关键词】何首乌饮;衰老大鼠;下颌下腺;egf;egfmrna　【abstract】objectivetoobservetheeffectsofheshournainsubmandibularglandsofagingrats.methodsdgalactosesenescencemodelentexperiments.spimmunohistochemistryethodrna

3、.resultsamongpreventingnormalandmodelgroups,egfandegfmrnaexpressioninnormalgroupodelratsediumdoseofheshournaexpressionsinsubmandibularglandcellsshoalormodelgroup(p<0.01).theeffectediumdoseofheshoualcontrolgroupandselfrestoringgroup(p<0.01).conclusionsheshournainsubmandibularglandsfo

4、rdelayingaging.　　【keyandibulargland;egf;egfmrna　　下颌下腺是具有外分泌和内分泌双重功能的腺体，有关衰老下颌下腺研究很少。.研究表明，下颌下腺分泌量随年龄增长明显下降〔1〕。本实验检测下颌下腺表皮生长因子(egf)、egfmrna的表达状况，探讨何首乌饮对衰老大鼠下颌下腺分泌egf功能的影响，进一步探讨下颌下腺的衰老相关性变化，为衰老病人涎腺功能减退性疾病的预防、治疗提供依据。　　1材料与方法　　1.1材料与仪器　　egf、egfmrna、sp试剂盒及二氨基联苯胺(dab)显色剂(武汉博士德生物工程公司);vt1000s振荡切片

5、机(德国leica公司);olympus光学显微镜(日本);何首乌饮由《宣明论方》何首乌丸加味而成(贾春华教授提供)。　　1.2方法　　1.2.1实验动物来源及分组　　实验大鼠购自河北省实验动物中心，合格证编号：605106。实验动物饲养室温度(22±2)℃，相对湿度50%～70%，选用体重180～220g的8周龄清洁级sd雌性大鼠90只，随机分为预防性和治疗性两大实验部分，每部分5组，每组9只。　　1.2.2动物模型的建立　　大鼠称重后按300mg·kg-1·d-1腹腔注射d半乳糖，每日一次，连续60d。　　1.2.3其他各组动物的处理方法　　正常组(n)大鼠正常喂60

6、d。何首乌饮预防高(ph)、中(pm)、低(pl)剂量组大鼠腹腔注射d半乳糖的同时分别灌胃何首乌饮(3.872，1.936，0.968g/100g)，水煎浓缩成0.6ml/100g，1次/d，连续60d。阴性对照组(nc)大鼠按0.5ml/100g腹腔注射生理盐水，1次/d，连续60d后灌胃生理盐水0.6ml/100g，1次/d，连续60d。自然恢复组(sr)大鼠造模成功后正常喂养60d。何首乌饮治疗th、tm、tl剂量组大鼠造模成功后分别灌胃何首乌饮(剂量、时间同上)。　　1.2.4免疫组织化学切片制备及染色　　大鼠麻醉后，开胸，经左心室插管入主动脉，4%多聚甲醛灌注

7、，取下颌下腺，标本固定于4%多聚甲醛液中24h，常规梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。连续切片，片厚6μm，每隔30张取相邻5张，按试剂说明书的操作步骤，用sp法行常规免疫组化染色、去除组织蛋白等处理，操作完成后封片。　　1.2.5原位杂交染色程序　　按试剂说明书的操作步骤，石蜡切片经常规脱蜡至水，后固定，预杂交，杂交，洗涤，封闭，滴加细胞免疫组化法(sabc)试剂，滴加生物素化过氧化物酶，dab显色，充分水洗，酒精脱水，二甲苯透明，封片。　　1.2.6细胞计数　　对egf免疫细胞化学染色的切片及egfmrna原