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时间:2018-11-08
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1、何首乌饮对D半乳糖所致衰老大鼠下颌下腺β半乳糖苷酶表达的影响李俊玫高福禄葛志华李俊颖【摘要】 目的通过观察何首乌饮干预的衰老大鼠下颌下腺β半乳糖苷酶(βgal)表达的改变,探讨何首乌饮的抗衰老作用。方法用D半乳糖制造衰老大鼠模型,何首乌饮的干预作用分治疗和预防两部分,检测β半乳糖苷酶活性,观察下颌下腺衰老细胞数目改变。结果预防性实验部分:模型组衰老细胞数目多于正常组和各预防性用药组;治疗性实验部分:用药各组与自然恢复组相比,衰老细胞数目明显减少,其中治疗中剂量组最低。结论何首乌饮具有抗模型大鼠下颌下腺细胞衰老的作用。【关键词
2、】何首乌;D半乳糖;衰老大鼠;下颌下腺;β半乳糖苷酶 【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheapoptosisofsubmandibularglandularcellsandtheeffectsofHeshouandibularglandsofagingrats.MethodsDgalactosesenescencemodelentexperiment.Theβgalactosidaseactivityentalpartoftheprevention,thenumberoftheagingposi
3、tivecellsinmodelsubmandibularglandsalandpreventinggroups.Partofthetreatmentexperiment,thenumberoftheagingpositivecellsintreatmentgroupsodelrats'submandibulargland. 【Keyandibulargland;βgalactosidase 衰老是在生物发育成熟后,随年龄的增加,机体的器官、组织出现功能、形态的退变乃至老化的过程。下颌下腺是具有外分泌和内分泌双重功能的腺体,能够分泌
4、70%的唾液和近50种生物活性物质,其分泌的某些生物活性物质完全达到激素水平,对机体多种组织、器官有重要的支持、营养及调节作用。近年来,关于下颌下腺功能的研究逐渐深入,但对其衰老与抗衰老的研究却少有报道。本实验采用D半乳糖诱发的亚急性衰老模型,通过对β半乳糖苷酶活性的检测,观察下颌下腺衰老细胞数目的改变;探讨何首乌饮对衰老大鼠下颌下腺的影响,为何首乌饮在延缓组织退行性改变、增强老年性保健、预防衰老性涎腺疾病方面奠定研究基础。 1材料与方法 1.1材料与仪器 何首乌饮方剂由炙何首乌、怀牛膝、肉苁蓉、淫羊藿、丹参、茯苓组成,由本院贾
5、春华教授提供;实验大鼠购自河北省实验动物中心,合格证编号:605106。 1.2实验动物的选择及分组 选用8周龄清洁级SD雌性大鼠90只,体重180~220g,随机分为预防性和治疗性两大实验部分,每部分5组,每组9只。 1.3模型的建立及各组动物的处理方法 预防性用药部分:正常组(N)大鼠正常喂60d;模型组(M)大鼠腹腔注射D半乳糖(300mg·kg-1·d-1),连续60d;何首乌饮(HS)、低(Pl)剂量组大鼠腹腔注射D半乳糖的同时分别灌胃何首乌饮(3.872,1.936,0.968g·100g-1·d-1,水煎浓缩成0
6、.6ml·100g-1·d-1),每天1次,连续60d。治疗性用药部分:阴性对照组(NC)大鼠按0.5ml·100g-1·d-1腹腔注射生理盐水,连续60d后灌胃生理盐水0.6ml·100g-1·d-1,连续60d。自然恢复组(SR)大鼠腹腔注射D半乳糖,连续60d后正常喂养60d。HS)、低(Tl)剂量组大鼠腹腔注射D半乳糖,连续60d后分别灌胃何首乌饮(剂量同上),每天1次,连续60d。 1.4新鲜标本的取材 各组大鼠末次给药后1h,10%水合氯醛(0.3ml/100mg)腹腔注射麻醉,剪开颈部皮肤,分离并摘取下颌下腺,置液
7、氮中保存备用。 1.5组织衰老特异性β 半乳糖苷酶冰冻切片的制备及染色准备厚为10μm的冰冻切片,按照试剂说明书的要求,操作完成后封片即刻在光学显微镜下观察和计数,表达β半乳糖苷酶活性的地方呈蓝色,每组取3张切片,每张切片随机观察3个视野,计算视野中每100个细胞中阳性细胞率。 1.6统计学方法 资料分析采用SPSS11.0统计软件完成。计量资料描述采用x±s,组间比较行单因素方差分析,组间多重比较用SNKq检验。 2结果 β半乳糖苷酶检测显示胞浆呈深蓝色者为阳性细胞(图1),表明细胞处于衰老状态。方差分析结果显示,预
8、防性实验部分的组间β半乳糖苷酶表达,M组衰老细胞数目多于N组和各预防性用药组,差异有统计学意义(P0.01);治疗性实验部分的组间β半乳糖苷酶表达,用药各组与SR组相比,衰老细胞数目明显
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