delta模块hla配型检测方法的建立

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1、Delta模块HLA配型检测方法的建立作者：吕沁风，章伟，朱发明，严力行【摘要】为了建立delta模块配型的检测方法，采用盐析法提取DNA，PCR技术扩增delta模块，GeneScan模式检测PCR产物。结果表明，在104份随机样本中，PCR扩增出的delta模块具有高度多态性。DNA片段长度范围在81-393bp，片段数目为6-32个；片段长度集中在81-118bp，140-175bp，217-301bp，340-393bp4个区域。结论：建立的delta模块配型技术是可行的，可以用于造血干细胞移植供者的筛选。首次获得了中国汉族人群delta模块的数据资料。【关键词】delta

2、模块　　EstablishmentofDeltaBlockMatchingTechnique　　AbstractToestablishdeltablockHLA-matchingtechnique，DNAethod，deltablockplifiedbypolymerasechainreaction(PCR)，andPCRproductorphismin104samplesZhejiangprovince.TherangeofDNAfragmentlengthbersofDNAfragmentsethodofdeltablockmatchingisreliableandcanbea

3、ppliedtoselectdonorsforthepatientstobetransplanted.ItisthefirsttimetogetdeltablockdataoftheHanpeopleinChina.　　Keyatching;HLA-matchingtechnique;blockmatching　　模块配型技术（blockmatching）在造血干细胞移植中具有一定的意义。HC）中的非HLA标记与供者相合可以提高存活率，减少急性GVHD的发生，这种非HLA标记的检测技术被称为模块配型。MHC模块包括alpha、beta、gamma、delta4个模块，delta模块

4、配型是检测HLA-DR和DQ周围的序列。国外对beta和delta模块配型技术进行了一些研究，但是国内研究较少。参照有关　　结果　　delta模块扩增　　每个样本扩增出不同数目和不同长度的DNA片段。样本扩增出的DNA片段个数为6-32个（附表），长度在81-393bp之间。这些片段构成每个样本各自独特的基因型（附图）。　　delta模块DNA片段长度分布　　delta模块扩增出DNA片段长度大小不一，相对较为集中分布在81-118bp，140-175bp，217-301bp，340-393bp4个区域。其中每个样本有固定的峰：81bp，91bp和163bp。　　delta模块检测

5、的重复性　　从这些样本中随机选取10个，重复相同的条件3次，每个样本每次均得到相同数目和长度的片段，说明该方法有良好的重复性。Table.DistributionofdeltablockintheHanpeople（略）　　造血干细胞移植供受者delta模块配型相合情况　　23对亲缘关系供受者中有22对供受者Delta模块相合，1对delta模块不同。26对非亲缘关系的造血干细胞供受者中，6对delta模块相合，20对delta模块不同。　　讨论　　造血干细胞移植是治疗白血病、重症再生障碍性贫血等疾病的重要手段，大部分病人需寻找无血缘关系的HLA位点相合的供者。国外的研究报道，大约

6、有30％的患者可能找到亲缘关系的供者，而70％的病人则需要寻找非亲缘关系的供者。研究表明，在供受者HLA-A、-B、-DRB6位点相合的情况下，亲缘关系供者比非亲缘关系供者的效果要好，推测MHC模块是否相合可能是其中的原因之一。近年来，一些研究者关注非HLA区域在移植中的作用，如杀伤性细胞免疫球蛋白受体（KIR）基因和细胞因子基因的多态性、MHC模块等。Trimboli等［3］发现，供、受者HLA-A，-B，-DRB6位点相合的移植病人，在供、受者beta和delta模块相合的情况下，急性GVHD的发生率和程度比beta模块和（或）delta模块不合的病人显著降低，这表明供、受者d

7、elta模块相合可能会降低GVHD的发生，因此在HLA位点配型的基础上，检测供受者delta模块是否相合对于造血干细胞移植供者的选择具有一定的参考意义。MHC模块包括alpha、beta、gamma、delta4个模块，每个模块是研究特定HLA基因周围相关的序列，这些非HLA序列呈现高度的多态性，包含双核苷酸重复序列。检测模块的每条引物在该模块中有2-3个特定的结合位点，重复序列的拷贝数目和引物位置的微小变化都会引起模块检测结果的变化，因此随机人群的模块配型结果都不相