delta模块hla配型检测方法的建立论文

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1、Delta模块HLA配型检测方法的建立论文.freelentofDeltaBlockMatchingTechniqueAbstractToestablishdeltablockHLA-matchingtechnique，DNAethod，deltablockplifiedbypolymerasechainreaction(PCR)，andPCRproductorphismin104samplesZhejiangprovince.TherangeofDNAfragmentlengthbersofDNAfrag

2、mentsethodofdeltablockmatchingisreliableandcanbeappliedtoselectdonorsforthepatientstobetransplanted.ItisthefirsttimetogetdeltablockdataoftheHanpeopleinChina.Keyatching;HLA-matchingtechnique;blockmatching模块配型技术（blockmatching）在造血干细胞移植中具有一定的意义。HC）中的非HLA标记与供者相

3、合可以提高存活率，减少急性GVHD的发生，这种非HLA标记的检测技术被称为模块配型。MHC模块包括alpha、beta、gamma、delta4个模块，delta模块配型是检测HLA-DR和DQ周围的序列。国外对beta和delta模块配型技术进行了一些研究，但是国内研究较少。参照有关文献［1］，我们建立了delta模块配型技术，并对汉族人群样本进行了分析，现将结果报告如下。材料和方法样本来源随机选取104例浙江汉族非血缘关系的人群，抽取全血，EDTA抗凝待用。23对亲缘关系的HLA-A、-B、-DRB6位

4、点相合的造血干细胞供、受者和26对非亲缘关系的HLA-A、-B、-DRB6位点相合造血干细胞供、受者，均来自本中心进行HLA配型的患者和供者。仪器与试剂MJ-240型DNA扩增仪（美国MJ公司产品）；PCR缓冲液（10×buffer）、10×dNTP、MgCl2、TaqDNA聚合酶（Roche公司产品）。引物参照文献1］设计，delta-F为HEX-5′GATAGAGAGGATTCTAAATG3′；delta-R为5′TGGAACAGCCAGAAGGAC3′，其中delta-F引物5′端标记荧光基团HEX。

5、引物由上海基康生物技术公司合成。DNA抽提方法按快速盐析法［2］。PCR扩增PCR扩增体系总反应体积为10μl，其中含10×PCRbuffer1.0μl，样本DNA1.0μl，TaqDNA聚合酶0.4U；dNTP、MgCl2终浓度分别为0.2mmol/L和2.0mmol/L，特异性引物终浓度为0.5μmol/L。PCR扩增参数扩增参数为：95℃预变性5分钟，95℃变性30秒，48℃退火30秒，72℃延伸30秒，35个循环，冷却至4℃。产物检测以ROX500作为分子内标，取产物0.5μl与上样缓冲液1μl混合

6、，95℃热变性3分钟后速冷，上ABIPRISM377测序仪以基因扫描（GeneScan）模式进行PAGE电泳，采用Geype软件进行数据分析。结果delta模块扩增每个样本扩增出不同数目和不同长度的DNA片段。样本扩增出的DNA片段个数为6-32个（附表），长度在81-393bp之间。这些片段构成每个样本各自独特的基因型（附图）。delta模块DNA片段长度分布delta模块扩增出DNA片段长度大小不一，相对较为集中分布在81-118bp，140-175bp，217-301bp，340-393bp4个区域。

7、其中每个样本有固定的峰：81bp，91bp和163bp。delta模块检测的重复性从这些样本中随机选取10个，重复相同的条件3次，每个样本每次均得到相同数目和长度的片段，说明该方法有良好的重复性。Table.DistributionofdeltablockintheHanpeople（略）造血干细胞移植供受者delta模块配型相合情况23对亲缘关系供受者中有22对供受者Delta模块相合，1对delta模块不同。26对非亲缘关系的造血干细胞供受者中，6对delta模块相合，20对delta模块不同。讨论造血

8、干细胞移植是治疗白血病、重症再生障碍性贫血等疾病的重要手段，大部分病人需寻找无血缘关系的HLA位点相合的供者。国外的研究报道，大约有30％的患者可能找到亲缘关系的供者，而70％的病人则需要寻找非亲缘关系的供者。研究表明，在供受者HLA-A、-B、-DRB6位点相合的情况下，亲缘关系供者比非亲缘关系供者的效果要好，推测MHC模块是否相合可能是其中的原因之一。近年来，一些研究者关注非HLA区域在移植中的作用，如杀伤性