desmin基因exon6 a360p错义突变与克山病的关系

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1、Desmin基因exon6A360P错义突变与克山病的关系作者：张洁　刘作功　郭雄　赖江华【摘要】　　目的探讨Desmin基因exon6的A360P错义突变与克山病心肌损伤发生发展的关系。方法采用临床流行病学方法调查，随机抽取年龄、性别相匹配的慢型和潜在型克山病患者、病区正常组和非病区正常组各30例血样，提取基因组DNA，采用PCR扩增、酶切、电泳等技术比较各组Desmin基因片断酶切位点的变化。结果慢型和潜在型克山病患者与病区正常组未检出Desmin基因exon6的A360P错义突变位点。结论Desmin基因exon6的A360P错义突变可能不是克山病心肌损伤的易感基因突变

2、。【关键词】克山病；Desmin基因；易感基因；　　克山病与扩张性心肌病(dilatedcardiomyopathy,DCM)的主要病理变化均为心肌的变性、坏死、纤维化(替代瘢痕)，最终导致心脏功能失代偿[1]，两病在心肌病理学变化、临床症状体征上均缺乏特异性的鉴别诊断指标[2]。近年来已发现一些与DCM相关的基因突变，如细胞骨架蛋白基因(desmin、dystrophin、laminA/C、δsarcoglycon、Metavinculin等)和心肌肌小节成分蛋白基因(Actin、atropomyosin、TroponinT、βMHC、Titin、cMyBPC、

3、MLP等)[34]。国内报道[5]克山病患者心肌组织中Desmin荧光染色明显异常，离病灶越近Desmin改变越明显，且与病程成正相关，以慢型克山病多见。已知desmin基因的多个突变中，exon6错义突变与DCM相关性较大，但与慢型和潜在型克山病的关系仍不明确。为此，本调查采用PCR和凝胶电泳的方法检测慢型和潜在型克山病患者中是否存在与DCM患者相同的desmin基因exon6错义突变，以寻找可能的鉴别诊断指标。　　1材料与方法　　1.1调查对象与分组选取陕西省黄陵县店头镇各乡296例、非克山病病区西安市长安区30例为调查对象，依据中国《克山病诊断标准》(标准编号：GB1

4、702121997)，检出慢型和潜在型克山病患者82例，临床表现主要有心律失常、多发性室早、房颤等，其中慢型克山病患者占4.7%(14例)，潜在型患者占23.0%(68例)。随机抽取克山病患者组30例(病例组)，病区内正常对照组30例(内对照组)。非病区正常对照组30例(外对照组)。方差分析病例组与其他两组年龄和性别没有显著性差异。　　1.2样品采集与处理使用含知情同意书的统一调查表进行调查后，采集肘静脉血5mL，EDTA抗凝，冰块保存运输，置-25℃冰箱低温保存。　　1.3实验方法　　1.3.1外周血DNA的制备血样采用盐析法制备DNA，用于做PCR扩增和基因突变的酶切分析

5、。　　1.3.2Desmin基因突变位点与引物序列选择Desmin的基因组DNA全长11990bp，有9个外显子，其中exon6的突变类型为A360P位点错义突变，exon6上、下游引物序列来源于　　图1内对照组exon4被Bsp1286I酶切鉴定结果（略）　　Fig.1Identificationofexon4byrestrictionendomucleaseBsp1286I　　图2克山病患者exon6片断酶切前PCR电泳图（略）　　Fig.2Electropherogramofexon6inkeshandiseasecasesbeforeincidedbyBsp1286I

6、　　M:DL2000marker;1-22:thecasesofkeshangroup　　图3各组exon6片断被Bsp1286I酶切鉴定结果（略）　　Fig.3Identicationofexon6indifferentcasesdigestedarker;1-16:thecasesofpeopleinthegroup.　　A:keshangroup;B:normalcontrolintheareaofkeshan;C:normalcontrolintheareaofnonkeshan　　3讨论　　慢型克山病与DCM除地区分布不同外，其心肌病理学变化、临床症状体征上均具有

7、许多相似的表现[8]。尽管克山病心肌组织中desmin蛋白荧光染色出现明显异常，但在本次调查中未能证实慢型和潜在型克山病患者desmin基因exon6出现A360P错义突变引起的蛋白变性，表明desmin基因exon6的A360P错义突变与慢型克山病心肌损伤关系不密切。有调查报道[4]DCM家族中先证者与其发病同胞中有desmin基因A360P和N391I错义突变，酶切分析显示少数亲属可出现其中的一种突变，但未发病，说明A360P错义突变有一定的外显率。同时在211例健康对照者中未发现其中任一种错义突变