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《大肠杆菌中乙醇合成途径的构建》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第21卷第2期 2002年3月无锡轻工大学学报 JournalofWuxiUniversityofLightIndustryVol.21 No.2Mar. 2002 文章编号:1009-038X(2002)02-0116-04大肠杆菌中乙醇合成途径的构建谢丽萍, 诸葛健, 王正祥(江南大学教育部工业生物技术重点实验室,江苏无锡214036)摘 要:采用PCR技术扩增了运动发酵单孢菌Zymomonasmobilis的两个产乙醇的关键酶基因pdc和adhⅡ,分别克隆到载体pUC19和pUC18中,形成重组质
2、粒pUC19::pdc和pUC18::adh,从中分离出两基因并串联到经EcoRⅠ酶切的pUC18中,转化大肠杆菌E.coliDH5α获得重组质粒pPA.携带pPA的重组菌Pp+a被证明具有丙酮酸脱羧酶酶活且提高了乙醇脱氢酶酶活.通过代谢工程在Escherichiacoli中成功地构建了乙醇合成途径.关键词:乙醇;重组大肠杆菌;代谢工程中图分类号:O623.41文献标识码:AConstructionofanEthanolSynthesisPathwayinEscherichiacoliXIELi2ping, ZHUGEJian
3、, WANGZheng2xiang(TheKeyLaboratoryofIndustrialBiotechnology,MinistryofEducation,SouthernYangtzeUniversity,Wuxi214036,China)Abstract:ThetwokeygenesencodedpyruvatedecarboxylaseandalcoholdehydrogenaseⅡforethanolproductionwereamplifiedbyPCRfromthechromosomalDNAofZymomon
4、asmobilis.TheamplifiedproductsweredigestedandinsertedintopUC19orpUC18toformrecombinantplasmidpUC19::pdcandpUC18::adh,respectively.TherecombinantplasmidpPAforethanolbiosynthesiswasfurtherconstructedbyinsertingpdcandadhgenefrompUC19::pdcandpUC18::adhintopUC18atEcoRⅠsi
5、tebytransformingintoE.coliDH5α.E.coliPp+acarryingpPAwasproved
tohaveactivityofpyruvatedecarboxylaseandhigheractivityofalcoholdehydrogenasethantheorigi2nalorganism.AnethanolbiosynthesispathwaywasconstructedsuccessfullyinEscherichiacolibymetabolicengineering.Keywords:
6、ethanol;recombinantE.coli;metabolicengineering 乙醇工业是我国轻工业领域中重要的一部分,油醛生成乙醇.20世纪80年代初发现并深入研究通过微生物将葡萄糖等转化为乙醇是乙醇生产的的运动发酵单胞菌能够以较高的转化率将葡萄糖主要方法之一,能够生物合成乙醇的微生物主要为等碳源转化成乙醇,其代谢途径和酵母相似.由于厌氧和兼性厌氧型,包括酵母和细菌,但生物合成其对糖的耐受力低,生长速度慢,且只能利用3种途径有所不同.酵母是通过丙酮酸脱羧酶(PDC)和化合物,加上工业设备不完善等原因,无法在乙
7、醇
乙醇脱氢酶(ADH)催化糖酵解中间产物32磷酸甘发酵生产中得到独立的运用.尽管酵母具备理想的 收稿日期:2001-08-29; 修订日期:2001-12-20. 基金项目:教育部优秀青年教师基金项目资助课题.作者简介:谢丽萍(1977-),女,江西宁冈人,发酵工程硕士研究生.©1994-2006ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.http://www.cnki.net第2期谢丽萍等:大肠杆菌中乙醇合成途径的构建117乙醇生产者的
8、特性,但它不能发酵许多廉价和易获5′GCTTGTCGACAGGCTTACGGCT3′;得的基质,从而使乙醇生产费用较高,而且发酵后adhⅡprimer1:的酒糟废料易造成环境污染.细菌(如大肠杆菌)的5′TGCTGTCGACTAGTATGTAGGGTGAG3′乙醇生物合成途径
