骨髓间充质干细胞对慢加急性肝衰竭小鼠调节性B细胞的影响

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1、中山大学硕士学位论文骨髓间充质干细胞对慢加急性肝衰竭小鼠调节性B细胞的影响EffectofmarrowmesenchymalstemcellsonregulatoryBcellsinacuteonchronicliverfailuremice.专业名称：内科学（传染病学）申请人：曾慧敏导师：林炳亮教授答辩委员会主席：答辩委员会委员：中山大学附属第三医院2015年5月中国广州骨髓间充质干细胞对慢加急性肝衰竭小鼠调节性B细胞的影响专业内科学（传染病学）硕士研究生曾慧敏导师林炳亮教授中文摘要【背景】肝功能衰竭（Liverfailure

2、）是多种因素导致的肝脏解毒、合成、排泄、生物转化等功能障碍，病死率在60%以上。亚太地区以慢加急性肝衰竭（Acuteonchronicliverfailure,ACLF）多见。肝衰竭目前最有效的治疗方法为肝移植，但肝移植受限于供肝缺乏、排斥反应、巨大经济负担等多方面因素，难以广泛应用，而间充质干细胞（Marrowmesenchymalstemcell,MSC）移植治疗作为一种新型治疗方法具有较好应用前景。前期大量研究证实，MSC同时具有多向分化、免疫调节等功能，但MSC在体内的免疫调节作用机制研究较少，尤其是MSC移植术治疗AC

3、LF的免疫调节作用机制少有报道。调节性B细胞（RegulatoryBcell,Breg）作为免疫调节网络的重要组成部分，是一群具有调节免疫应答、抑制炎症反应等功能的细胞亚群，其在MSC治疗ACLF时免疫调节作用相关研究较少。因此，本研究旨在对Breg细胞在ACLF免疫失衡中的作用及Breg细胞在MSC治疗ACLF时如何参与免疫调节进行初步探讨。I【目的】1.研究Breg细胞在慢加急性肝衰竭的小鼠免疫失衡的作用。2.探讨MSC移植治疗ACLF小鼠过程中，Breg细胞是否参与MSC免疫调节功能。【材料与方法】1.连续8周腹腔注射四氯

4、化碳的方法诱导慢性肝纤维化模型，此后给予单次亚致死量四氯化碳造成急性肝脏损伤，构建ACLF的小鼠疾病模型，观察对比疾病组与对照组的Breg细胞的表达和功能。2.分离、培养MSCs，经尾静脉注射MSCs细胞悬液治疗ACLF小鼠，观察24h累计生存率。3.分别采集对照组、ACLF组、MSC治疗组小鼠的肝脏、脾脏、外周血，分离提取其中的淋巴细胞，加入PMA+Ionomycin+Monensin+LPS（PIM+L）刺激++5h，流式细胞术检测CD19IL-10B细胞比例，并采用ELISA检测淋巴细胞培养液中IL-10表达水平。【结果】

5、1.ACLF组小鼠的24h累积生存率较对照组小鼠降低（20%VS100%，P<0.001）。++2.ACLF小鼠肝脏、脾脏、外周血的CD19IL-10B细胞表达频率高于对照组，分别为(2.97±0.33)%Vs(0.75±0.11)%，(4.13±0.67)%Vs(0.79±0.11)%，(5.87±1.00)%Vs(0.68±0.09)%，P值均小于0.001。3.ACLF小鼠肝脏、脾脏、外周血IL-10的分泌水平高于对照组，分别为(16.76±1.73)Vs(6.29±0.70)pg/ml，(21.21±1.62)Vs(8.

6、23±1.52)pg/ml，(31.32±2.95)II4.Vs(7.49±1.22)pg/ml，P值均小于0.001。5.MSC治疗组小鼠24h累计生存率高于ACLF组小鼠（60%VS10%，P<0.05）。6.MSC治疗组小鼠肝脏、脾脏、外周血的CD19+IL-10+B细胞表达频率低于ACLF组，分别为(2.27±0.17)%Vs(3.67±0.21)%，P<0.001，(2.57±0.25)%Vs(5.14±0.59)%，P<0.05，(3.00±0.24)%Vs(5.93±0.99)%，P<0.05。7.MSC治疗小鼠肝

7、脏、脾脏、外周血IL-10的分泌水平低于ACLF组小鼠，分别为(14.08±2.04)Vs(19.97±1.06)pg/ml，(16.30±2.22)Vs(23.41±1.41)pg/ml，(18.05±2.39)Vs(33.21±3.31)pg/ml，差异有统计学意义（t=2.458，P<0.05；t=2.77，P<0.05；t=3.53，P<0.01）。【结论】1.慢加急性肝衰竭小鼠的24h累计存活率降低，其肝脏、脾脏、外周血的Breg细胞表达频率及IL-10的表达高于对照组，Breg在慢加急性肝衰竭小鼠疾病进展中起重要作用

8、。2.MSC移植治疗可提高ACLF小鼠生存率，可能与MSC下调Breg数量以及IL-10分泌有关。【关键词】慢加急性肝衰竭；调节性B细胞；骨髓间充质干细胞；免疫调节；IL-10IIIEffectofmarrowmesenchymalstemcellsonregu