松江鲈不同种群间的分子标记和遗传多样性分析

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3、析摘要一个物种遗传多样性的高低与其对环境适应能力、生存能力和进化潜能紧密相联。因此，了解已是濒危物种的松江鲈群体遗传多样性，对其保护与管理策略的制定具有重要意义。现有报道尚难以全面、客观地反映中国现有松江鲈的遗传多样性现状。本研究以松江鲈(Trachidermusfasciatus)鸭绿江(YL)、滦河(LR)、山东黄河入海口(YR)、富春江(FR)等4个群体为研究对象，利用RAPD-SCAR标记、微卫星DNA和细胞色素b基因序列，分别从核基因和细胞质基因角度分析松江鲈群体的遗传多样性、遗传结构和种群分化，研究结果将为松江鲈种质资源的保护与利用、

4、种群鉴别提供分子生物学上的基础资料主要研究结果如下：1、松江鲈群体遗传多样性的RAPD分析和SCAR标记的转化首先，从294条10个碱基随机引物中，筛选出32条多态性引物，对富春江、黄河、滦河和鸭绿江等4个松江鲈群体共120尾个体进行RAPD分析。结果表明，松江鲈群体的遗传多样性较丰富，其主要表现在：①在扩增得到的591个位点中，有515个(87.14%)位点呈现多态性，群体间多态位点比率(P)的大小顺序为：富春江群体89.17%>黄河群体87.99%>鸭绿江群体86.63%>滦河群体83.25%。②松江鲈群体间的Shannon信息指数(I)和N

5、ei’s遗传多样性指数(H)分别在0.3393~0.3566和0.2157~0.2279间，滦河群体的值较其他3群体稍低；若作为一个整体，则总的Shannon信息指数(I)和Nei’s遗传多样性指数(H)分别为0.3710±0.2153和0.2336±0.1643。③虽然群体间基因流值(Nm)在5.76103～19.84497间，显示各地理群体间存在程度不同的基因交流，但分子方差分析(AMOVA)结果却表明，各群体间存在显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)的遗传分化。④聚类分析表明，鸭绿江群体首先与黄河群体聚为一支，再与富春江群体相聚，最

6、后与单独一支的滦河群体聚类，表明鸭绿江、黄河、富春江等3群体间的遗传距离与彼此间的地理距离远近密切相关，而滦河群体与它们的遗传距离较远。其525bp605bp841bp695bp825bp次，从获得的S1225、S1225、S1225、S1345、S1345等5个特异I上海海洋大学硕士学位论文605bp841bp560bpRAPD条带中,成功地由S1225、S1225条带分别转化出SCAR01、443bpSCAR02的SCAR标记。这两个标记的出现频率，在鸭绿江群体最高(96.67%和93.33%)、富春江群体其次(83.33%和90%)、黄河群

7、体再其次（56.67%和66.67%)、560bp443bp滦河群体最低(13.33%和20%)。因此，SCAR01、SCAR02可作为鉴别松江鲈滦河群体与其他3群体的分子标记。2、松江鲈微卫星标记的开发及群体遗传变异分析(1)应用生物素-磁珠富集法，开发松江鲈的微卫星分子标记。共挑选222个克隆，经菌液PCR检测后得到158个为阳性克隆。经测序后得到129条微卫星序列，其中完美型占45.74%（59），非完美型占45.74%（59），混合型占8.52%（11）。选取两端侧翼序列足够长且重复次数大于7的微卫星序列，用软件PrimerPremier

8、3.0设计引物，共60对。经YR群体和YL群体各30尾样本检测后，发现其中的19对引物表现出多态性，表现在：等位基因数在10~20之间，