急性细菌性腹膜炎对豚鼠小肠cajal间质细胞的影

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1、急性细菌性腹膜炎对豚鼠小肠Cajal间质细胞的影【关键词】Cajal,间质细胞；KIT蛋白；小肠；腹膜炎　　［摘要］目的探讨豚鼠腹膜炎模型中小肠Cajal间质细胞网络的变化情况。方法利用腹腔内注射大肠杆菌和10%BaSO4肉汤佐剂的方法建立腹膜炎模型，冰冻切片和全层铺片并结合KIT免疫细胞化学染色观察。结果腹膜炎12～24h，腹膜炎症状最明显，在切片和铺片上均可见ICCs明显减少，其中ICMY减少最显著，48～96h后ICCs的数量逐渐恢复正常，同时豚鼠的腹膜炎反应也减轻甚至康复。结论小肠壁内ICCs在腹膜炎模型中可明显减少，但随着时间延长

2、，ICCs逐渐恢复正常的细胞网络。　　［关键词］Cajal间质细胞；KIT蛋白；小肠；腹膜炎　　EffectsofacutebacterialperitonitisoninterstitialcellsofCajalinintestinalodelofacutebacterialperitonitis.MethodsPeritonitismodelscoliand10%BaSO4brothadjuvant,ICCsountpreparationmunohistochemistry.Results12~24hoursafterperitoni

3、tis,symptomsofperitonitisountpreparation,especiallyforICMY,beranddistributionofICCsrestoredtonormal.ConclusionAcutebacterialperitonitismightleadtotemporarylossofICCs,anditl，结合10%BaSO4牛肉汤作佐剂每只1ml，无菌状态下，左下腹腹腔注射［4］。　　1.2.2免疫细胞化学染色在致腹膜炎后12h、24h、48h取相应部位小肠，经生理盐水冲洗后，OCT包埋，冰冻切片，片

4、厚7～10μm，风干，100%丙酮固定30min（25℃）。染色方法为间接酶标抗体法［5］。切片经0.01mol/LPBS充分漂洗后，0.03%H2O2/甲醇封闭内源性过氧化物酶20min（25℃），1%BSA孵育30min后加入第一抗体，KIT单克隆抗体4℃，48h，HRP标记的兔抗大鼠IgG抗体25℃，60min，0.05%TrisHCl/0.05%DAB/0.01%H2O2（pH7.5）显色，镜下观察，适时终止反应，终产物为棕褐色，水溶性封片剂封片。对照实验以正常鼠血清代替一抗，或兔血清代替二抗，结果均为阴性。各步骤间用PBS漂洗3次

5、。取正常对照组豚鼠相应部位小肠进行冰冻切片和全层铺片作为，染色方法同上。　　1.3半定量分析和统计学处理　　选取正常和各实验组铺片15张，进行KIT免疫细胞化学染色，应用ImageproPlus5.0随机计数每平方毫米内的KIT阳性细胞面积，结果以平均值±标准差(±s)表示，应用SPSS11.0软件对数据进行单因素方差分析。　　2结果　　腹膜炎动物模型建立成功，豚鼠出现毛发杂乱、少动、少食等症状，在12～24h最严重，可出现急性弥漫性化脓性炎症，有5%的豚鼠于24h内死亡。KIT免疫细胞化学染色显示，正常豚鼠空肠的ICCs主要分布在肠壁肌间

6、神经丛周围，深肌丛附近及环行平滑肌内，肠壁全层铺片可见ICMY呈网络状分布于肠壁肌间神经丛周围，细胞体呈梭形或卵圆形，核周胞质少，胞浆着色浅，可见2～4个细长的突起，每个突起有2～3级的分支（图1a、b）。腹膜炎12h和24h，切片可见ICMY明显减少，铺片可见距离肌间神经丛越远的ICCs减少越明显，细胞网络被破坏（图1c）。48h较24hICCs有明显增加（图1d），至96h时基本恢复正常分布。计算每平方毫米内KIT阳性面积的变化，结果显示正常小肠KIT阳性面积为（0.228±0.121）mm2，KIT免疫细胞化学染色而腹膜炎12h、24

7、h和48h分别为（0.152±0.057）mm2、（0.158±0.068）mm2和（0.198±0.077）mm2。统计学分析显示，各实验组与正常组间均有显著性差异（P<0.05），见图2。　　a:正常小肠切片;b:正常小肠铺片;c:腹膜炎12h小肠铺片;d:腹膜炎48h小肠铺片　　图1豚鼠小肠切片及铺片（略）　　图2各组每平方毫米内KIT阳性细胞面积（略）　　3讨论　　ckit为一种原癌基因，位于人染色体4q1112，为白色斑点显性基因（dominantcellfactor）的Ⅲ型酪氨酸激酶受体(Kit受体)，该受体分为游离型和膜

8、结合型两种。应用抗ckit蛋白的抗体于胚胎晚期或出生前注射阻断Kit受体的功能，ICCs的正常发育会受到严重的影响。Huizinga等［2］对自发性ckit基因突变的小鼠研究表明