新生小鼠小肠cajal间质细胞增殖的实验研究

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1、新生小鼠小肠Cajal间质细胞增殖的实验研究新生小鼠小肠cajal间质细胞增殖的实验研究：于彬，韩鹃，梅峰单位：第三军医大学基础部组织学与胚胎学教研室，重庆400038【】目的探讨在新生小鼠小肠cajal间质细胞（interstitialcellsofcajal，icc）的发育过程中是否出现增殖。方法采用新生2d（p2d）、14d（p14d）和24d（p24d）的小鼠小肠，应用brdu腹腔注射，24h后取材，kit和brdu免疫荧光染色。结果p2d小鼠小肠，可见大量kit/brdu双重标记阳性细胞，这些细胞的形态与成熟icc基本相似，这些细胞在p14d时减少，而在p24d

2、消失。统计学分析发现，不同时间点之间kit/brdu双标阳性细胞数量存在显著差别（p＜0.05）。结论在小肠生后发育过程中，出现了icc增殖，而这种增殖在发育过程中逐渐减弱，最后在成年前消失。【关键词】cajal间质细胞；增殖；kit蛋白；brduastudyoninterstitialcellsofcajalproliferationinmurinesmallintestineduringpostnatalperoidyubin,hanjuan,meifeng(departmentofhistologyandembryology,thirdmilitarymedical

3、university,chongqing400038,china)abstract:objectivetoinvestigatetheappearanceofinterstitialcellsofcajalproliferationduringpostnataldevelopment.methodspostnatalmiceaged2days(p2d),14days(p14d)and24days(p24d)munohistochemcalstainingedtorevealtheproliferativeicc.resultskit/brdudoublelabelingc

4、ellsallintestineof2daysoldmice,andthesecellsilaratureonesinfeatures.andthosecellsreducedatp14dandvanishedatp24d.conclusionourresultindicatedthaticcproliferateduringthepostnataldevelopment,andtheproliferationgraduallyreducedandvanishedbeforeadulthood.keyg/g）。1.2.2免疫细胞化学染色brdu注射24h后取各组小鼠小肠

5、，0.01mol/lpbs冲洗小肠，100%丙酮固定小肠20min，解剖显微镜下，用镊子撕去小肠的粘膜层和粘膜下层，获得小肠平滑肌层铺片。pbs漂洗3次，每次5min。1%bsa孵育30min后加入第一抗体，kit单克隆抗体（1∶100）4℃48h，cy3标记的兔抗大鼠igg抗体（1∶100）25℃60min。随后4%多聚甲醛固定10min，2mol/lhcl处理标本30min（室温），pbs漂洗3次，每次5min，加入第二个一抗，brdu单克隆抗体（1∶100）4℃48h，fitc标记的羊抗小鼠igg抗体（1∶100）25℃60min。水溶性封片剂封片。激光共聚焦显微镜

6、（leicatcssp5）或者荧光显微镜观察照相，cy3和fitc分别用528nm和488nm光波激发。对照实验以正常鼠血清代替一抗，或兔血清代替二抗，各步骤间用pbs漂洗3次。1.3半定量分析及统计学处理选各组铺片5张，荧光显微镜下随机选择10个视野，统计kit阳性和kit/brdu双标记阳性的细胞数量，统计结果用spss11.0软件进行单因素方差分析，p＜0.05具有显著性差异。2结果kit免疫荧光显示，kit阳性的icc在肌间神经丛周围呈X络状分布，p2d组iccX络基本形成，但是细胞数量较少，而且细胞的突起较少（图1a），说明此时的icc多为幼稚细胞。p14d组小

7、鼠小肠icc细胞密度较高，形成较完整的细胞X络（图1b）。p24d组小肠icc具有粗大的初级突起和多个次级突起，这些突起相互之间连接成细胞X络（图1c）。统计结果显示生后不同时期icc的细胞密度存在明显差别（p＜0.05）。a：生后2d，icc细胞数量较少，细胞突起较细而稀疏；b：生后14d可见icc的突起较粗大并有多级分支，形成细胞X络；c：生后24d，icc细胞X络完整，可见细胞突起相互连接图1kit免疫荧光染色显示生后不同时期小鼠小肠icc的变化brdu染色标记在细胞核，kit/brdu双重免疫荧光染色显示，在p2d组小